Clonagem molecular e expressão de proteínas
O objetivo da clonagem molecular é inserir o gene de interesse (do inglês, GOI) em um vetor de plasmídeo, que é um fragmento circular de DNA que contém vários elementos para facilitar a clonagem, selecionar os clones e expressar proteínas. Muitas vezes, os pesquisadores usam enzimas de restrição de DNA e ligase para inserir o GOI na estrutura do vetor de expressão para posterior expressão de proteínas. Em seguida, esse vetor é inserido em uma célula que expressará a proteína codificada pelo GOI ou a expressão proteica é obtida pelo uso de sistemas de síntese proteica isenta de células.
Quando a proteína é expressa, a função proteica pode ser estudada, pois afeta a sinalização celular, a morfologia celular ou outros aspectos dentro da célula. Alternativamente, a proteína pode ser expressa em grandes quantidades, purificada e usada em inúmeras aplicações a jusante (downstream). Para obter mais informações, explore nossa oferta abrangente de reagentes e recursos confiáveis disponíveis para todo o fluxo de trabalho de clonagem e expressão para sistemas de expressão de proteínas de mamíferos, bactérias e insetos.
Enzimas de restrição e enzimas modificadoras do DNA
Em clonagem molecular, os pesquisadores frequentemente usam dois tipos gerais de enzimas, as enzimas de restrição, para cortar o DNA, e enzimas modificadoras, para fazer modificações em ácidos nucleicos, em geral, antes da etapa de ligação. Explore nossa linha extensa de enzimas de restrição e outras enzimas modificadoras, como fosfatase alcalina, protease, T7 RNA polimerase, ribonuclease A e T4 DNA ligase para todas as suas necessidades de pesquisa.
Sistemas de expressão e vetores de expressão isentos de componentes celulares, que usam promotores de CMV e a tecnologia de cauda FLAG®
Nosso portfólio de clonagem e expressão torna a engenharia genética mais barata e mais eficiente, fornecendo uma série de vetores versáteis com protocolos e kits de clonagem simplificados. Escolha dentre nossa ampla gama de sistemas de clonagem e expressão, incluindo nosso sistema de síntese ou expressão de proteínas isento de componentes celulares, como o kit de expressão de proteínas isentas de componentes celulares de próxima geração (germe de trigo) (n.º do produto CFPS700) e o kit ALiCE® (n.º do cat. AL0103000). Ademais, descubra os vetores de expressão bacteriana e de mamíferos FLAG® para expressão periplásmica ou citoplásmica em sistemas de transfecção transitórios ou estáveis e expresse com segurança sua sequência FLAG® ou 3X FLAG® na extremidade N ou C com um sítio de clivagem de enteroquinase (Ek) para remover a cauda de fusão, se necessário.
Sistema pET da Novagen®, vetores SnapFast™, vetores Simplicon™ e sistemas de expressão de proteínas UCOE™
Todos os vetores de expressão de E. coli e vetores de expressão de insetos conferem resistência à ampicilina para facilitar a seleção de transformantes positivos. Descubra o sistema pET da Novagen®, o padrão ouro para clonagem e expressão de proteínas recombinantes em expressão bacteriana. Projetada pela Oxford Genetics, a família de vetores SnapFast™ oferece um protocolo rápido e fácil, que permite a transferência de um GOI (gene de interesse) de um vetor para outro usando os sítios de corte SnapFast™, gerando vetores que são compatíveis com sistemas de expressão de insetos, leveduras, bacterianos e de mamíferos. Com nossa tecnologia de vetores de expressão com elemento universal de abertura da cromatina (Ubiquitous Chromatin Opening Element, UCOE™), é possível obter gramas de proteína em menos de 30 dias em células de mamíferos transfectadas de modo estável. A tecnologia de expressão com UCOE™ impede o silenciamento de transgenes e proporciona expressão gênica consistente, estável e de alto nível, até 20 vezes maior que os vetores convencionais, independentemente do sítio de integração cromossômica. O sistema de expressão de proteínas in vivo Simplicon™ é um sistema de expressão à base de RNA sintético, autorreplicante, ajustável e sem integração no genoma que gera expressão de proteínas imediata e altamente sustentada de vários genes em células humanas transfectadas sem o risco de integração no genoma. Para obter mais informações, assista ao nosso vídeo sobre a tecnologia Simplicon™ utilizada para geração eficiente de CTPi (células-tronco pluripotentes induzidas) humanas.
Reagentes e recursos para transformação bacteriana e de leveduras
Transformação bacteriana é o processo de inserção de DNA estranho em bactérias, com o uso de métodos como choque térmico e eletroporação. Nosso portfólio de células competentes foi elaborado para expressão de proteína ideal até mesmo para as proteínas recombinantes mais difíceis. Explore nosso Guia de seleção de células competentes pare escolher dentre várias novas células competentes bacterianas para uma ampla variedade de aplicações, inclusive expressão de proteínas, clonagem de rotina ou difícil e geração de bibliotecas. Além disso, a expressão de proteínas recombinantes em Saccharomyces cerevisiae tem muitas vantagens, como protocolos simples, uso de reagentes básicos e escalabilidade. Explore os diversos produtos disponíveis para transformação de levedura como parte do fluxo de trabalho de expressão de proteínas. Nossas células competentes NovaBlue®, otimizadas para eficiência de transfecção e preservação de plasmídeos, respalda o preparo de bibliotecas e estabilidade de plasmídeos superiores. Ademais, as células competentes da Novagen® foram projetadas para facilitar o enovelamento adequado de proteínas, maior solubilidade ou expressão de proteínas citotóxicas. As marcas mais populares são os sistemas Rosetta™, Origami™ e Overnight Express™.
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