Kits de isolamento de células

Embora o estudo de células derivadas de tecidos in vivo seja mais preditivo da biologia e função celular, a complexidade biológica pode confundir os resultados a menos que as populações de células-alvo sejam isoladas. Para estudar os fenótipos celulares, diversos métodos evoluíram para isolar populações celulares com base nas características definitivas. O isolamento de populações celulares não apenas ajuda na pesquisa biológica, como também facilita testes diagnósticos clínicos. Os métodos de isolamento mais eficazes demonstram rendimento, pureza e viabilidade aprimorados. O enriquecimento ou a purificação de populações-alvo pode ser obtido por seleção positiva, frequentemente com o emprego de anticorpos que se ligam a marcadores específicos para células, ou por seleção negativa, que pode usar propriedades biofísicas para remover células indesejadas para enriquecer a população-alvo.

Há bastante tempo, o fracionamento de células em componentes subcelulares é essencial para estudos de biologia celular. Técnicas de fracionamento subcelular foram amplamente usadas para estudar a estrutura e a função de organelas e compartimentos subcelulares, bem como entender o local, processamento e tráfego de biomoléculas. O objetivo da maioria das técnicas de fracionamento é obter organelas e macromoléculas celulares em um estado funcional, em que podem reter suas propriedades bioquímicas intrínsecas. Muitas vezes, isso é obtido por lise celular empregando meios mecânicos brandos ou com detergentes suaves, seguida frequentemente pelo fracionamento de componentes celulares por centrifugação diferencial.

Isolamento de células por fenótipo

Pré-adipócitos podem ser usados para estudar o processo de adipogênese e pós-diferenciação, para avaliar a lipólise, sinalização celular, função endócrina e atividade metabólica.

Nosso kit de isolamento de pré-adipócitos combina as ferramentas e reagentes necessários para isolar a fração vascular celular estromal do tecido adiposo. A fração vascular estromal resultante é cultivada em uma placa de cultura de tecidos, à qual os pré-adipócitos se aderem. Os pré-adipócitos mantêm a capacidade de proliferar e se diferenciar em adipócitos quando tratados com componentes que induzem a diferenciação.

Isolamento de organelas e complexos subcelulares

A derivação de componentes subcelulares promove o entendimento da função de organelas e pode levar a novas biotecnologias. Por exemplo, núcleos isolados de células de mamíferos podem ser usados posteriormente para a síntese de transcritos primários de RNA endógeno. O kit de preparo de núcleos de alto rendimento EZ (NUC101, NUC201) foi desenvolvido para o rápido isolamento de núcleos da maioria das células de mamíferos.

Para a detecção de integridade mitocondrial e potencial de membrana, nosso kit de coloração mitocondrial (CS0390, CS0760) usa o corante JC-1 (420200, T4069), que se concentra na matriz mitocondrial para formar agregados vermelhos fluorescentes. Eventos como apoptose que dissipam o potencial da membrana mitocondrial impedem o acúmulo do corante JC-1 nas mitocôndrias e um microscópio fluorescente pode ser usado em seguida para distinguir as mitocôndrias viáveis das danificadas.

Complexos subcelulares que não são organelas, como proteassomas, também podem ser isolados para uso em ensaios proteolíticos. Nosso método usa esferas de matriz de afinidade contendo uma proteína de fusão GST com um domínio semelhante à ubiquitina ligado a GST-agarose.

Enriquecimento de citoesqueleto

Tradicionalmente, trabalhar com as proteínas que se associam ao citoesqueleto de actina foi um desafio devido à insolubilidade dos elementos citoesqueléticos em detergentes como o Triton X-100. O kit de enriquecimento e isolamento do citoesqueleto ProteoExtract^® da Millipore contém tampões de purificação de citoesqueleto que retêm a adesão focal e proteínas associadas à actina e, ao mesmo tempo, remove proteínas citoplásmicas e nucleares solúveis da célula. Esta abordagem aprimora a capacidade de detectar e estudar proteínas associadas à actina pouco abundantes que, frequentemente, são ocultadas nos métodos de western blot para análise de lisados de células inteiras.