2GRKB

KAPA2G Robust PCR-Kit

• Synonym(e): PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 200 reactions; sufficient for 500 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Haltbarkeit: ≤12 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart: no
• Verpackung: pkg of 100 U (KK5023); pkg of 250 U (KK5024)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Robust DNA-Polymerase der zweiten Generation wurde weiterentwickelt, um das Problem uneinheitlicher Amplifikation über ein großes Spektrum an Amplicontypen (GC- und AT-reich) zu beheben. Das KAPA2G Robust PCR Kit ermöglicht eine höhere Prozessivität und spezifische Aktivität, was zu einer robusteren PCR-Leistung, höherer Sensitivität und verbesserter Toleranz gegenüber gängigen Inhibitoren führt. Die hohe Leistung der KAPA2G Robust DNA-Polymerase eignet sich ideal für schwierige PCR-Anwendungen und Proben, und macht eine Optimierung mit mehreren Enzymen und Protokollen überflüssig.
Das Enzym wird mit drei Reaktionspuffern und einem firmeneigenen Verstärker für GC-reiche PCR geliefert. KAPA2G Puffer A wurde speziell für die besonderen Eigenschaften der gentechnisch entwickelten KAPA2G-Enzyme formuliert; KAPA2G Puffer B wird hingegen empfohlen, wenn Template-Proben mit PCR-Inhibitoren kontaminiert sind. KAPA2G GC-Puffer wird für GC-reiche PCR empfohlen, während KAPA-Verstärker 1, ein firmeneigener DNA-Destabilisator, in GC-reichen Assays oder Assays mit einer problematischen Sekundärstruktur mit KAPA2G Puffer A oder B kombiniert werden kann.

Anwendung

Das KAPA2G Robust PCR Kit wird wie folgt verwendet:

• Amplifikation von GC- und AT-reichen Templates und Gen-Amplifikation
• Templates mit gängigen PCR-Inhibitoren wie Salzen, Harnstoff, SDS oder Ethanol
• PCR von unverarbeiteten Proben wie Wangenabstriche und kultivierte Säugetier-, Hefe- oder Bakterienzellen
• Kolonie-PCR
• Routine-PCR
• PCR-Amplifikation
• Avipoxvirus-spezifische PCR
• Simplex-PCR
• Semiquantitative PCR

Biochem./physiol. Wirkung

Die Genauigkeit von KAPA2G Robust ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ einbezogenen Nukleotiden. Durch KAPA2G Robust DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente haben die gleichen Merkmale wie DNA-Fragmente, die mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase erzeugt wurden, und können zur Sequenzierung und Klonierung sowie zum Restriktionsenzymverdau verwendet werden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Robust eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Wirksame Amplifikation von GC- und AT-reichen Zielen

• Robuste Leistung über einen großen Bereich an GC- und AT-reichen Matrizen
• Höhere PCR-Erfolgsraten

Verbesserte Toleranz gegenüber gängigen PCR-Inhibitoren

• Wirksame Amplifikation von unverarbeiteten Proben
• Höhere Ausbeute und Sensitivität je Einheit Enzym

Unübertroffene Leistung bei Kolonie-PCR

• Höhere Ausbeute und verbesserte Konsistenz von PCR direkt aus E. coli und Hefezellen

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Robust PRC Kits enthalten KAPA2G Robust DNA-Polymerase, die für eine hohe Prozessivität und Inhibitortoleranz entwickelt wurde.
• Sowohl aufgereinigte genomische DNA als auch unverarbeitete Proben (z. B. Kolonie-PCR) können als Matrix verwendet werden.
• 0,5 U KAPA2G Robust DNA-Polymerase je 25 μl Reaktion verwenden. Bei schwierigeren PCRs (GCrich, Rohprobe) sind unter Umständen höhere Enzymkonzentrationen erforderlich.
• Verwenden Sie 15 Sek./kb Extensionszeit je Zyklus und erhöhen Sie diese bei schwierigen Amplikonen oder Matrizen auf 30 bis 60 Sek./kb.
• KAPA2G Puffer enthalten 1,5 mM MgCl₂ bei 1X.
• Weiteres MgCl₂ kann unter Verwendung der 25 mM MgCl₂-Lösung aus dem Kit hinzugefügt werden.
• KAPA2G Puffer A ist optimiert auf hohe Ausbeute, Spezifität und Sensitivität.
• KAPA2G Puffer B wird empfohlen für Inhibitor-kontaminierte Templateproben.
• KAPA2G GC-Puffer wird empfohlen für PCR bei hohem GC-Gehalt (>70 % GC).
• KAPA Verstärker 1 kann mit KAPA2G Puffer A oder B verwendet werden, besonders für Assays bei hohem GC-Gehalt.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge KAPA2G Robust DNA-Polymerase enthält nachgewiesen <2 % verunreinigendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Robust PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert werden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird. Die Langzeitlagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Beachten Sie bitte, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, bei einer Kontaminierung während der Verwendung viel anfälliger für eine Zersetzung sind. Die Lagerung bei den nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Robust Standard or HotStart^® DNA Polymerase 5 U/μL
• 5X KAPA2G Buffer A with MgCl₂
• 5X KAPA2G Buffer B with MgCl₂
• 5X KAPA2G GC Buffer with MgCl₂
• 5X KAPA Enhancer 1
• MgCl₂ 25 mM

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H302,H371,H412
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash