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KAPA2G Fast HotStart Genotypisierungsmix

with dye

• Synonym(e): Genotypisierung, PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5620); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5621)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable; genotyping: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

KAPA2G Fast HotStart^® Maus-Genotypisierungskits beinhalten KAPA Express Extrakt, ein neues thermostabiles Protease- und Puffersystem, das die Extraktion von PCR-bereiter DNA aus Mausgewebe in nur 15 Minuten ermöglicht, sowie KAPA2G Fast Genotypisierungsmix mit Farbstoff, der eine DNA-Polymerase enthält, die durch gerichtete Evolution für hohe Prozessivität und Geschwindigkeit optimiert wurde. Die Kombination von KAPA Express Extrakt und KAPA2G Fast Genotypisierungsmix ermöglicht eine zuverlässige Extraktion und Amplifikation von DNA-Fragmenten aus Mausgewebe in nur 1 Stunde, während konventionelle Protokolle ≥1 Tag dafür beanspruchen. KAPA2G Fast Genotypisierungsmix (2X) ist eine gebrauchsfertiger Master-Mix, der alle erforderlichen Komponenten für eine schnelle PCR enthält, einschließlich Stabilisatoren und zwei inerten Farbstoffen, aber ohne Primer und Template.

Anwendung

KAPA2G Fast HotStart^® Genotypisierungsmix wird für folgende Anwendungen eingesetzt:

• Genomische DNA-Extraktion und Herstellung eines Master-Mixes für PCR
• Extraktion und Amplifikation aus murinem Schwanz-, Ohren- und Zehengewebe
• Extraktion und Amplifikation von DNA aus anderen Tiergeweben

Biochem./physiol. Wirkung

Durch KAPA2G Fast Genotypisierungsmix erzeugte DNA-Fragmente haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren kloniert werden. Sie können außerdem für nachgelagerte Routineanalysen oder -anwendungen eingesetzt werden, wie u. a. beim Restriktionsenzymverdau sowie bei der Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität auf, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ einbezogene Nukleotide. Im Gegensatz zu bestehenden Protokollen, die sich auf den Verdau von Proteinase K stützen, können Extraktionen mit KAPA Express Extrakt problemlos in einem einzigen Röhrchen durchgeführt werden, ohne dass gefährliche Chemikalien verwendet oder mehrstufige Waschschritte durchgeführt werden müssen.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Höherer Durchsatz, schnellere Verarbeitungszeit und höhere Zuverlässigkeit:

• PCR-bereite DNA in nur 15 Minuten
• Reduzierte Gefahr von Probenverlust oder Kontamination durch minimale Handhabung
• Ausreichend Template für mehrere Assays; einfach skalierbar für Proben in einem 96-Well-Format
• Schnelle und zuverlässige Amplifikation von DNA-Fragmenten über eine große Bandbreite von Amplikon-Längen und GC-Inhalten

Übertrifft Rohextraktionsmethoden und kommerzielle Kits:

• Schnellere Verarbeitungszeiten
• Höhere Spezifität
• Reduzierte Kosten

Einige Anmerkungen:

• Extrahieren Sie PCR-bereite DNA aus murinem Schwanz-, Ohren- oder Zehengewebe in 15 Minuten
• Verdünnen Sie den DNA-Extrakt 10fach vor der PCR in 10 mM Tris-HCl (pH 8,0-8,5) und verwenden Sie 1 μl DNA pro 25 μl Reaktion.
• Extrakte sind bei -20 °C >6 Monate haltbar.
• KAPA2G Fast (HotStart) Genotypisierungsmix enthält KAPA2G Fast DNA-Polymerase für die schnelle PCR sowie Puffer, MgCl₂ (1,5 mM bei1X) und dNTPs (je 0,2 mM bei 1X).
• Ladefarbstoff für die Elektrophorese ist im KAPA2G Fast Genotypisierungsmix enthalten, damit PCR-Produkte zur Analyse direkt auf Agarosegele geladen werden können.
• Verwenden Sie eine Annealingdauer von 15 s und eine Extensionsdauer von 15 s für Amplikons von <1 kb oder eine 15-30 s/kb Extension für längere Amplikons.

Verpackung

• 2X KAPA2G Fast Standard oder HotStart Genotypisierungsmix mit Farbstoff

Wird auf Trockeneis geliefert; in bestimmten Regionen können die Lieferbedingungen in manchen Fällen jedoch abweichen.

Qualität

Alle Komponenten der KAPA2G Fast HotStart Maus-Genotypisierungskits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4°C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H371
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Gefahreneinstufungen: STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash