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KAPA2G Robust HotStart ReadyMix

2 ×, with dye

• Synonym(e): PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤12 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5704); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5705)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: 2 ×
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Robust DNA-Polymerase der zweiten Generation wurde weiterentwickelt, um das Problem uneinheitlicher Amplifikation über ein großes Spektrum an Amplikontypen (GC- und AT-reich) zu beheben. Dieses Produkt ermöglicht eine höhere Prozessivität und spezifische Aktivität, was zu einer robusteren PCR-Leistung, höherer Sensitivität und verbesserter Toleranz gegenüber gängigen Inhibitoren führt. Die hohe Leistung der KAPA2G Robust DNA-Polymerase eignet sich ideal für schwierige PCR-Anwendungen und Proben, und macht eine Optimierung mit mehreren Enzymen und Protokollen überflüssig.

KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ eignet sich besonders gut für die Amplifikation von DNA-Fragmenten.

Anwendung

KAPA2G Robust HotStart^® ReadyMix^™ wird verwendet in:

• PCR
• Echtzeit-RT-PCR
• Nested-Polymerase-Kettenreaktion (nPCR)
• Amplifikation von GC- und AT-reichen Templates
• Templates mit gängigen PCR-Inhibitoren wie Salzen, Harnstoff, SDS oder Ethanol
• PCR von unverarbeiteten Proben wie Wangenabstriche und kultivierte Säugetier-, Hefe- oder Bakterienzellen
• Kolonie-PCR

KAPA2G Robust HotStart ReadyMix kann für eine schnelle und effiziente DNA-Extraktion und PCR mit KAPA Express Extrakt kombiniert werden. Weitere Informationen finden Sie in den Anwendungshinweisen für:

• Blut-PCR
• DNA-Barcoding für Säugetiere
• DNA-Barcoding für Fische
• FFPE-PCR

Biochem./physiol. Wirkung

Mit KAPA2G Robust HotStart^® DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente haben die gleichen Eigenschaften wie DNA-Fragmente, die mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase erzeugt werden. Sie können für routinemäßige Downstream-Analysen oder -Anwendungen, einschließlich Restriktionsenzymverdau, Klonierung und Sequenzierung, verwendet werden. Die Genauigkeit von KAPA2G Robust HotStart ist vergleichbar mit der des Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei etwa 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ eingebauten Nukleotiden. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Robust HotStart eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität auf, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese)-Aktivität.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Effiziente Amplifikation von GC- und AT-reichen Targets

• Robuste Leistung bei einer breiten Palette von stark GC- und AT-haltigen Templates
• Höhere PCR-Erfolgsraten

Verbesserte Toleranz gegenüber gängigen PCR-Hemmern

• Wirksame Amplifikation von unverarbeiteten Proben
• Höhere Ausbeute und Sensitivität pro Enzymeinheit

Unübertroffene Leistung bei Kolonien-PCR

• Höhere Ausbeute und verbesserte Konsistenz bei PCR direkt aus E. coli- und Hefezellen

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix PRC-Kits enthalten KAPA2G-Robust-DNA-Polymerase, die speziell für eine hohe Prozessivität und Inhibitortoleranz entwickelt wurde.
• Sowohl aufgereinigte genomische DNA als auch unverarbeitete Proben (z. B. Kolonien-PCR) können als Template verwendet werden.
• Verwenden Sie eine Extensionszeit von 15 s/kb pro Zyklus und erhöhen Sie diese bei schwierigen Amplikonen oder Templates auf 30–60 s/kb.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix enthält 2 mM MgCl₂ bei 1X.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix mit Farbstoff enthält zwei inerte Tracking-Farbstoffe, wodurch ein direktes Auftragen auf Agarosegele ermöglicht wird.
• KAPA2G Robust HotStart ReadyMix eignet sich ideal für Einzelprotokoll-PCRs, d. h. die Amplifikation von Fragmenten variiert von 25 bis 65 % GC bis zu einer Länge von 1 kb, wobei ein einzelnes Reaktionsaufbau- und Durchlaufprotokoll verwendet wird.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge der KAPA2G Robust HotStart DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Robust HotStart ReadyMix PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die langzeitige Lagerung sollte bei -20 °C erfolgen. Sofern alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur belassen wird. Eine langfristige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Hinweis: Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, sind bei einer Kontaminierung während der Verwendung wesentlich zersetzungsanfälliger. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht für den Einsatz in diagnostischen Verfahren geeignet.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Robust HotStart^® DNA Polymerase 1U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 2mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H371
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Gefahreneinstufungen: STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash