11277073910
Roche
DIG RNA-Markierungsmix
sufficient for 20 reactions, solution
Synonym(e):
Nukleinsäuremarkierung
Anmeldenzur Ansicht organisationsspezifischer und vertraglich vereinbarter Preise
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About This Item
UNSPSC-Code:
41105500
Empfohlene Produkte
Form
solution
Qualitätsniveau
Verwendung
sufficient for 20 reactions
Verpackung
pkg of 40 μL
Hersteller/Markenname
Roche
Verunreinigungen
Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
Farbe
colorless
Löslichkeit
water: miscible
Lagertemp.
−20°C
Allgemeine Beschreibung
Markierungseffizienz: Etwa 10μg digoxigeninmarkierte RNA voller Länge wird aus 1μg linearer Template-DNA transkribiert.
Testzeit: 135 Minuten
Probenmaterialien
Linearisierte Plasmid-DNA:
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der neben dem Polylinker einen Promoter für SP6, T7 oder T3 RNA-Polymerase enthält. Für die Synthese von „Run-off-Transkripten“ wird das Plasmid durch ein Restriktionsenzym linearisiert. Es sollten Restriktionsenzyme verwendet werden, die 5′-Überhänge erzeugen; 3′-Überhänge sollten vermieden werden. Die linearisierte Template-DNA sollte durch Phenolchloroform-Extraktion und Ethanol-Ausfällung aufgereinigt werden, um eine RNase-Kontamination zu vermeiden. Für ′Run-around′-Transkription wird zirkuläre Plasmid-DNA verwendet.
PCR-Produkt:
PCR-Fragmente, die RNA-Polymerase-Promotersequenzen enthalten, können ebenfalls als Templates für die Transkription verwendet werden. Die Aufreinigung des PCR-Fragments mithilfe einer HighPure-Säule vor der Transkription wird empfohlen.
Testzeit: 135 Minuten
Probenmaterialien
Linearisierte Plasmid-DNA:
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der neben dem Polylinker einen Promoter für SP6, T7 oder T3 RNA-Polymerase enthält. Für die Synthese von „Run-off-Transkripten“ wird das Plasmid durch ein Restriktionsenzym linearisiert. Es sollten Restriktionsenzyme verwendet werden, die 5′-Überhänge erzeugen; 3′-Überhänge sollten vermieden werden. Die linearisierte Template-DNA sollte durch Phenolchloroform-Extraktion und Ethanol-Ausfällung aufgereinigt werden, um eine RNase-Kontamination zu vermeiden. Für ′Run-around′-Transkription wird zirkuläre Plasmid-DNA verwendet.
PCR-Produkt:
PCR-Fragmente, die RNA-Polymerase-Promotersequenzen enthalten, können ebenfalls als Templates für die Transkription verwendet werden. Die Aufreinigung des PCR-Fragments mithilfe einer HighPure-Säule vor der Transkription wird empfohlen.
DIG-markierte, einzelsträngige RNA-Sonden definierter Länge werden durch In-vitro-Transkription erzeugt. Unter Standardbedingungen wird DIG-11-UTP durch SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen bei etwa jedem 20. bis 25. Nukleotid des Transkripts eingebaut. Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.
Praktische Nukleotidmischung zur Markierung von RNA mit Digoxigenin-11-UTP.
Inhalt
10x-Lösung mit: 10 mM ATP, CTP, GTP (jeweils), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Praktische Nukleotidmischung zur Markierung von RNA mit Digoxigenin-11-UTP.
Inhalt
10x-Lösung mit: 10 mM ATP, CTP, GTP (jeweils), 6,5 mM UTP, 3,5 mM DIG-11-UTP.
Spezifität
Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μl 0,2 M EDTA (pH 8,0) gestoppt.
Anwendung
RNA-Markierung mit Digoxigenin-11-UTP durch In-vitro-Transkription mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen. DIG-markierte RNA werden in verschiedenen Hybridisierungsmethoden eingesetzt:
- Northern Blots
- Northern Blots
- Dotblots
- Plaque- oder Kolonie-Lifts
- RNase-Schutzversuche
- Chromosomen, Zellen und Gewebeschnitte in situ
Leistungsmerkmale und Vorteile
Der DIG RNA-Markierungsmix wurde spezifisch zur Verwendung mit SP6, T7 und T3 RNA-Polymerasen von Roche entwickelt, die mit einem optimierten Transkriptionspuffer geliefert werden.
Qualität
Funktionsgetestet im DIG RNA-Markierungskit und im DIG Nukleinsäure-Detektionskit.
Sonstige Hinweise
Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.
Signalwort
Warning
H-Sätze
Gefahreneinstufungen
Acute Tox. 4 Oral
Lagerklassenschlüssel
12 - Non Combustible Liquids
WGK
WGK 1
Flammpunkt (°F)
does not flash
Flammpunkt (°C)
does not flash
Analysenzertifikate (COA)
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