HTS163M

ChemiSCREEN Membranpräparation Rekombinantes Humanes GLP-1

Human GLP-1 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPγS binding.

• UNSPSC-Code: 41106514
• eCl@ss: 32161000
• NACRES: NA.41

Eigenschaften

• Biologische Quelle: human
• Qualitätsniveau: 100
• Rekombinant: expressed in Chem-9 cells
• Hersteller/Markenname: ChemiScreen; Chemicon^®
• Methode(n): ligand binding assay: suitable (GTPγS); radioligand binding assay (RLBA): suitable
• NCBI-Hinterlegungsnummer: NM_002062.2
• UniProt-Hinterlegungsnummer: P43220
• Versandbedingung: dry ice
• Angaben zum Gen: human ... GLP1R(2740)

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das glucagonartige Peptid-I (GLP-1), das zur Glucagon-Sekretin-Familie gehört, wird von L-Zellen des Dünndarms sezerniert und bindet an einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor der Klasse B (Klasse 2)(Mayo et al. 2003). Der GLP-1-Rezeptor wird in pankreatischen Betazellen exprimiert. Nach der Bindung an GLP-1 koppelt er an G_s und erhöht den cAMP-Spiegel und die Insulinsekretion. (Drucker et al. 1987). Außerdem wurde gezeigt, dass GLP-1 die Magenentleerung verzögert und und den Appetit reguliert. Der GLP-1-Rezeptor stellt daher ein wichtiges therapeutisches Ziel für Typ-II-Diabetes dar und das abbauresistente GLP-1-Analogon Exanatid wird in der Klinik in Kombination mit anderen Blutzucker senkenden Arzneimitteln zur Kontrolle von Typ-II-Diabetes eingesetzt. (D’Alessio et al. 2004). Millipores GLP-1-Rezeptor-Membranpräparationen werden aus unseren proprietären stabilen rekombinanten Zelllinien hergestellt, um eine hohe GPCR-Oberflächenexpression zu gewährleisten. Sie sind daher ideale HTS-Tools für das Screening auf Agonisten und Antagonisten am GLP-1-Rezeptor. Die Membranpräparationen weisen einen Kd-Wert von 0,27 nM für [¹²⁵I]-GLP-1 auf. Mit 10 μg/Well GLP-1-Rezeptor-Membranpräparation und 0,5 nM [¹²⁵I]-GLP-1 wurde ein über 9-faches Signal-Rausch-Verhältnis erzielt.

Humanes GLP-1

Anwendung

Radioliganden-Bindungsassay und GTPγS-Bindung.

Biochem./physiol. Wirkung

GPCR-Klasse: B

Ziel-Unterfamilie: Glucagon

Zielprotein: GLP-1

Qualität

SPEZIFIKATIONEN:
Signal:Hintergrund und spezifische Bindungswerte in einem Konkurrenzbindungsassay mit verschiedenen Mengen GLP-1-Membranpräparation erzielt:

	20 µg/Well	10 µg/Well
Signal:Hintergrund	12,0	14,9
Spezifische Bindung (cpm)	31366	27411

1 Einheit = 10 µg Membranpräparation


Bmax: 3,96 pmol/mg


Kd-Wert: 0,27 nm

Spezifikationen

Inkubationsbedingungen
Membranen werden mit einem radioaktiven Liganden und einem unmarkierten Kompetitor (getestete Konzentrationen siehe Abbildung 1 und 2) in Bindungspuffer auf einer nicht bindenden 96-Well-Platte gemischt und 1-2 h inkubiert. Vor der Filtration wir eine GF/C 96-Well-Filterplatte 30 min mit 0,33 % Polyethylenimin beschichtet und danach mit 50mM HEPES, pH 7,4, 0,5 % BSA gewaschen. Die Bindungsreaktion wird auf die Filterplatte überführt und 3 Mal (1 ml pro Well pro Waschvorgang) mit Waschpuffer gewaschen. Die Platte wird danach getrocknet und ausgezählt.

Bindungspuffer: 50 mM Hepes, pH 7,4, 5 mM MgCl₂, 1 mM CaCl₂, 0,2 % BSA, filtriert und bei 4 °C aufbewahrt
Radioligand: [¹²⁵I] GLP-1(7-36) (Perkin Elmer # NEX308)
Waschpuffer: 50 mM Hepes, pH 7,4, 500 mM NaCl , 0,1 % BSA, filtriert und bei 4 °C aufbewahrt.

Physikalische Form

Eine Packung enthält eine ausreichende Menge an Membranen für mindestens 200 Assays (Einheiten), wobei eine Einheit die Membranmenge ist, die mit ¹²⁵I-markiertem GLP-1 bei 0,5 nM ein über 9-faches Signal-Rausch-Verhältnis liefert.

Lösung in Verpackungspuffer: 50 mM Tris pH 7,4, 10 % Glycerin und 1 % BSA, ohne Konservierungsstoffe.
Verpackungsmethode: Membranproteine wurden auf die angegebene Konzentration in Verpackungspuffer eingestellt, schnell gefroren und bei -80 °C aufbewahrt.

Lagerung und Haltbarkeit

Gefroren bei -70 °C bis zu 2 Jahre aufbewahren. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden.

Rechtliche Hinweise

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

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• Lagerklassenschlüssel: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 2