Resolución de problemas observados en los cultivos celulares

El cultivo celular se ha convertido en una de las técnicas más fundamentales para el modelado de los sistemas biológicos y su importancia es cada vez mayor en los sectores biotecnológico y farmacéutico, además de ser un proceso esencial en los laboratorios de investigación en ciencias de la vida. Esta técnica es muy accesible, pero la propagación satisfactoria de las células para expandir el stock o los experimentos de modelado puede verse afectada por la contaminación u otras condiciones que afecten negativamente a la viabilidad celular. La práctica común de compartir células ha dado lugar a pruebas claras de contaminación cruzada de los stocks celulares cuya identidad antes era incuestionable. Identificar las razones, comunes o infrecuentes, por las que las células no consiguen prosperar puede aumentar la eficiencia del laboratorio, mejorar el rendimiento de los productos celulares y garantizar la obtención de datos significativos y fiables procedentes de modelos in vitro.

Identificación errónea de las líneas celulares

En estudios recientes se ha estimado que la identificación incorrecta puede afectar hasta a un tercio de todas las líneas celulares en uso. Estos descubrimientos podrían poner en cuestión los datos publicados sobre sistemas biológicos basados en los resultados obtenidos en los modelos de líneas celulares. Los factores que provocan la identificación incorrecta o la contaminación cruzada de las líneas celulares son:

• Contaminación con líneas celulares agresivas: el análisis isoenzimático ha demostrado que muchas líneas celulares comparten una isoforma enzimática rara con las células HeLa. Desde entonces, se ha demostrado que las células HeLa constituyen la línea celular invasiva más común en los stocks de cultivo.
• Prácticas de documentación y etiquetado: los matraces de cultivo celular, las placas, los crioviales y los recipientes para congeladores deben etiquetarse claramente y deben mantenerse estrictos mapas de almacenamiento del nitrógeno líquido que reflejen la adición, retirada y reubicación de los stocks celulares.
• Préstamo de líneas celulares: el intercambio de células entre laboratorios vecinos es una práctica común que induce errores en la identidad de la línea celular. Las líneas celulares sólo deben obtenerse de repositorios celulares reconocidos como ECACC, la Colección Europea de Cultivos Celulares Autenticados de Salud Pública de Inglaterra.

Infórmese sobre las causas comunes de contaminación cruzada de las líneas celulares y cómo proteger su trabajo de sus consecuencias.

Contaminación microbiana de los cultivos celulares

Los medios de cultivo celular y las condiciones de incubación proporcionan el entorno ideal para las células, así como para los contaminantes bacterianos, fúngicos y víricos. Para garantizar el cumplimiento diligente de técnicas de cultivo aséptico, los cultivos deben examinarse con regularidad al microscopio por si hubiera indicios de la presencia de intrusos bacterianos y fúngicos. Algunos contaminantes microbianos ubicuos evaden la detección visual, ya que se estima que hasta el 30 % de todos los cultivos están contaminados con micoplasmas. Los reactivos y kits diseñados para la detección de los invisibles micoplasmas suelen estar basados en la amplificación por PCR, que también puede utilizarse para detectar contaminantes víricos.

Aprenda a mantener sus cultivos libres de contaminantes biológicos y químicos.

Poco crecimiento celular

Resultante frustrante cuando células en cultivo que por lo demás parecen saludables no logran la confluencia. Una vez descartados los contaminantes, algunas posibles barreras para la duplicación celular saludable son:

• Estado y calidad de los medios de cultivo o de congelación
• Calidad e idoneidad para la aplicación de los suplementos
• Recuento impreciso de las células durante el pase o la congelación

Cuando las células parecen viables, pero no se expanden, sepa lo que puede hacer para mejorar las condiciones de cultivo y conseguir un crecimiento óptimo antes de devolverlas al nitrógeno líquido.

Desprendimiento de fenotipos celulares adherentes

Las células adherentes pueden desprenderse espontáneamente en el cultivo, solas o en láminas. Cuando los cultivos adherentes no se comportan así, sepa qué comprobar y cómo restablecer la cohesión en el cultivo.

Aglutinación celular

Las células en suspensión imitan las condiciones in vivo como singuletes. Cuando las células comienzan a agruparse, puede deberse a la presencia de ácidos nucleicos pegajosos en los medios cuando los cultivos están sometidos a estrés. ¿Qué se esconde en los medios que puede hacer que las células se agrupen? Encuentre aquí más información sobre cómo eliminar la aglutinación en los cultivos.

Muerte celular en el cultivo

Cuando las células mueren en el cultivo, primero debe descartarse la contaminación con microorganismos. Otros factores que pueden contribuir a una mala salud celular o a un comportamiento incoherente con el fenotipo son:

• Condiciones de congelación del stock
• Número de pases celulares o sobreconfluencia
• Estrés medioambiental
• Sobredigestión con enzimas de disociación

Para resolver los desenlaces inesperados de los cultivos celulares es fundamental disponer del equipo adecuado, reactivos cualificados y protocolos validados.

Precipitados en los medios de cultivo

Si no se trata de contaminación, las partículas en cultivo suelen tener una explicación inorgánica. Conozca los constituyentes equilibrados de medios y disoluciones tampón, y obtenga más información sobre cómo mantener en suspensión los constituyentes de los medios.