RPOLT7-RO

T7 RNA 聚合酶

from Escherichia coli BL 21/pAR 1219

• 同義詞: 聚合酶
• 酶委員會編號: 2.7.7.6 (BRENDA, IUBMB)
• 分類程式碼代碼: 12352204

屬性

• 生物源: Escherichia coli (BL 21/pAR 1219)
• 品質等級: 100
• 化驗: 100% (SDS-PAGE)
• 形狀: solution
• 比活性: ≥20 U/μL
• 分子量: 98 kDa (Single polypeptide chain)
• 包裝: pkg of 1,000 U (10881767001); pkg of 5,000 U (10881775001)
• 製造商／商標名: Roche
• 技術: Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• 顏色: colorless
• pH值: 7.9 (39 °F)
• 溶解度: water: miscible
• 適合性: suitable for molecular biology
• NCBI登錄號: ACY75835
• UniProt登錄號: P00573
• 應用: life science and biopharma
• 異物活動: Endonucleases 100 units, none detected; Nicking activity 100 units, none detected; RNase 100 units, none detected
• 儲存溫度: −20°C
• 基因資訊: Escherichia coli ... T7p07(1261050)

描述

一般說明

T7 RNA 聚合酶通常用于转录DNA，这些 DNA 已经克隆到具有两个相反方向的噬菌体启动子的载体中。可以使用不同的聚合酶，从插入 DNA 的任一链，选择性地合成 RNA。使用该系统可以产生同源标记的单链 RNA。转录物可以用生物素或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记，或用 [α-³²P] 或 [α-³⁵S] 标记的核苷酸放射性标记至高比活性。

杂交探针的合成：T7 RNA 聚合酶能高效生产均一标记的 RNA。该标记的 RNA 可用作 Southern、Northern 和斑点印迹中的杂交探针，以及原位杂交。
合适的标记：转录物可以用生物素-16-UTP 或 DIG-11-UTP 进行非放射性标记。它们也可以用 [α-32P]- 或 [α-35S] 标记的核苷酸放射性标记为高比活性。

特異性

启动子特异性
T7 RNA 聚合酶具有极高的启动子特异性，仅转录噬菌体 T7 DNA 或克隆到T7 启动子下游的 DNA。尽管 T7 和 T3 启动子序列仅相差 3bp，但 T7 RNA 聚合酶仅转录克隆到其启动子下游的DNA。
热灭火：通过加入 2 μl 0.2MEDTA（pH8.0）和/或加热至 65℃ 来终止反应。

應用

• T7 RNA 聚合酶可以转录来自 T7 启动子下游的克隆 DNA 模板的 RNA。可以用标记的 NTP 进行合成以产生高度标记的 RNA。合成的 RNA 有多种应用，包括：RNA 或 DNA 印迹技术
• 原位杂交
• RNA 酶保护研究：由酶合成的转录物可用作 RNA 剪接和加工研究的前体 RNA。
• 通过在转录反应期间加入 m7GpppG 或 m7GpppA 超过 GTP 或 ATP，以在体外合成加帽的 RNA。可以将产生的反义 RNA 引入细胞中，以抑制相应基因的表达。
• 微阵列靶标合成

包裝

1个试剂盒包含2个组分

單位定義

一个单位是在 + 37°C 下，60 分钟内，在酸可沉淀的 RNA 产物中掺入 1nmol CMP的酶活性。

体积活性：≥20 U/μl

準備報告

激活剂：T7 RNA 聚合酶被 BSA 或亚精胺强烈激活。

儲存和穩定性

保存于密闭容器内，置于干燥通风处。

其他說明

测试缓冲液
40mM Tris-HCl，pH 8.0（+ 20℃），6mM MgCl 2，10mM 二硫苏糖醇，2mM 亚精胺，pH 约 8.0（+ 20℃）。
缺乏内切核酸酶
1。将 1 μg DNA 与 T7 RNA 聚合酶在 + 37℃ 下，在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有 λDNA 降解的酶单位数 >100 U。
2。将 1 μg Eco RI/Hind III 片段的 λDNA 与 T7 RNA 聚合酶在 + 37℃ 下，在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示条带图案没有改变的酶单位数 >100 U。
缺乏切割活性
1 μg pBR322DNA 与 T7 RNA 聚合酶，在 + 37℃ 下，在 25 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有松弛超螺旋结构的酶单位的数量 >100 U。
缺少 RNA 酶
4 μg MS2 RNA 与 T7 RNA 聚合酶，在 + 37℃ 下，在 50 μl 测试缓冲液中孵育 4 小时。显示没有 MS2 RNA 降解的酶单位数 >100 U。
转录实验中的性能
T7 RNA 聚合酶在 SP6/T7 转录试剂盒（目录编号 10 999 644 001）。使用Eco RI和50mCi [alpha-32P] CTP，[400 Ci/mmol（15 TBq/mmol）] 线性化的 0.5 μg pSPT19neo DNA 的标准测定中的掺入率，在20分钟内，产生 >50% 的输入放射性。

仅用于生命科学研究。不适用于诊断程序。
Roche 公司有 10x 浓缩 RNA 标记混合物，专为 DIG-或生物素标记而设计。这些混合物可以与 T7 RNA 聚合酶很好地联合使用。

僅套裝組件

• T7 RNA Polymerase, in buffer, pH 7.9 ≥20 U/μl
• Transcription Buffer 10x concentrated

安全資訊

• 象形圖: GHS07
• 訊號詞: Warning
• 危險聲明: H319
• 防範說明: P264 - P280 - P305 + P351 + P338 - P337 + P313
• 危險分類: Eye Irrit. 2
• 儲存類別代碼: 12 - Non Combustible Liquids
• 水污染物質分類（WGK）: WGK 2
• 閃點（°F）: does not flash
• 閃點（°C）: does not flash