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一般說明
TMB（3，3′，5，5′-四甲基联苯胺）已被证明是HRP测定的安全敏感底物。最初，在HRP和过氧化氢存在下，形成单电子氧化产物。该化合物是阳离子自由基，呈蓝色，吸附最大值为653 nm。与HRP/H2O2进一步反应或用酸酸化自由基会产生二亚胺末端氧化产物，该产物在450 nm处吸附光。自由基（E653nm=3.9 x 104 mol-1 cm-1）和二亚胺（E450nm=5.9 x 104 mol-1 cm-1）的消光系数为HRP和HRP标记探针的测定提供了非常灵敏的系统。ES022是一种单组分试剂，在室温下稳定，对正常实验室光不敏感。对TMB和过氧化氢浓度进行了优化，并与通常用于免疫学分析的HRP浓度产生线性响应。
應用
方法概要：
分析物与固相结合并与HRP标记探针反应完成后，加入ES022。TMB的氧化产生蓝色反应产物，该产物在650 nm处测量。可以记录作为时间函数的颜色形成，或者在固定间隔后用氟化钠终止反应。通过添加酸将蓝色自由基转化为二亚胺，可以提高灵敏度。立即在450 nm处测量产生的黄色。
样品程序：
1. 完成全部与抗体，探针，HRP标记的试剂一起的所需培养。
2. 用含0.1%吐温-20的PBS或Tris缓冲盐水清洗平板至少4次。
3. 最后一次洗涤后，振摇并吸干平板孔中的全部残留缓冲液。
4. 将0.1 mL ES022（TMBE溶液）加入至适当的孔中并培养5-30分钟。
注意：反应时间将取决于HRP探针的活性。如果颜色变色太快，则零级动力学将不占优势。可能需要稀释探针，抗体或HRP标记的试剂。
5. 该反应可以作为动力学分析的时间函数进行监测，或者用0.1 mL 0.3 mol/L硫酸或0.1%氟化钠终止反应，并在450 nm下读取。
6. 如果该程序需要转化为黄色二亚胺，则加入0.1 mL上述试剂部分中所述的任何一种酸，并在5分钟内记录吸光度。
时间，试剂体积和温度的变化需要用户进行标准化。
分析物与固相结合并与HRP标记探针反应完成后，加入ES022。TMB的氧化产生蓝色反应产物，该产物在650 nm处测量。可以记录作为时间函数的颜色形成，或者在固定间隔后用氟化钠终止反应。通过添加酸将蓝色自由基转化为二亚胺，可以提高灵敏度。立即在450 nm处测量产生的黄色。
样品程序：
1. 完成全部与抗体，探针，HRP标记的试剂一起的所需培养。
2. 用含0.1%吐温-20的PBS或Tris缓冲盐水清洗平板至少4次。
3. 最后一次洗涤后，振摇并吸干平板孔中的全部残留缓冲液。
4. 将0.1 mL ES022（TMBE溶液）加入至适当的孔中并培养5-30分钟。
注意：反应时间将取决于HRP探针的活性。如果颜色变色太快，则零级动力学将不占优势。可能需要稀释探针，抗体或HRP标记的试剂。
5. 该反应可以作为动力学分析的时间函数进行监测，或者用0.1 mL 0.3 mol/L硫酸或0.1%氟化钠终止反应，并在450 nm下读取。
6. 如果该程序需要转化为黄色二亚胺，则加入0.1 mL上述试剂部分中所述的任何一种酸，并在5分钟内记录吸光度。
时间，试剂体积和温度的变化需要用户进行标准化。
外觀
提供的试剂：
含有TMB，2.08 μMol L（-1）和过氧化氢的液体溶液，柠檬酸缓冲液（pH值3.3）。还含有无毒的专有稳定剂。
所需物料：终止反应所需的试剂，但未提供用于终止反应和保存蓝色色原的
0.3 Mol L硫酸。
注意：试剂级水必须含有少于10（-7）mol/L的铁或铜盐，否则未反应的TMB将非酶促转化为二亚胺。
含有TMB，2.08 μMol L（-1）和过氧化氢的液体溶液，柠檬酸缓冲液（pH值3.3）。还含有无毒的专有稳定剂。
所需物料：终止反应所需的试剂，但未提供用于终止反应和保存蓝色色原的
0.3 Mol L硫酸。
注意：试剂级水必须含有少于10（-7）mol/L的铁或铜盐，否则未反应的TMB将非酶促转化为二亚胺。
色码：黄色
儲存和穩定性
在室温下可储存最长六个月。在2-8°C下可长期储存达12个月。避免暴露在阳光直射下。如果溶液为蓝色或浑浊，则丢弃。
使用前加热至室温。
提供的试剂： 含有TMB，2.08 mMol L（-1）和过氧化氢的液体溶液，柠檬酸缓冲液（pH值3.3）。还含有无毒的专有稳定剂。
使用前加热至室温。
提供的试剂： 含有TMB，2.08 mMol L（-1）和过氧化氢的液体溶液，柠檬酸缓冲液（pH值3.3）。还含有无毒的专有稳定剂。
法律資訊
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
免責聲明
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儲存類別代碼
12 - Non Combustible Liquids
水污染物質分類（WGK）
WGK 1
閃點（°F）
Not applicable
閃點（°C）
Not applicable
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