Porady i wskazówki: Sprzęt i analiza danych

Potrzebujesz porady dotyczącej wyboru ustawień sprzętu lub przeprowadzania analizy danych podczas wykonywania testów multipleksowych MILLIPLEX^®? Zapoznaj się z poniższymi poradami i wskazówkami ekspertów, w tym ustawieniami urządzeń Luminex^® multiplex, ogólnymi uwagami dotyczącymi urządzeń i wskazówkami dotyczącymi analizy danych.

• Ogólne ustawienia sprzętu dla aparatów multipleksowych Luminex^®
• Uruchamianie zestawów MILLIPLEX^® na innych urządzeniach Luminex^®
• Instrument Considerations for Running MILLIPLEX^® Assays
• Wskazówki dotyczące analizy danych
• Informacje o żądaniu

Ogólne ustawienia sprzętu dla urządzeń Luminex^® Multiplex Instruments

.Poniżej opisano wskazówki dotyczące ustawień sprzętu dla Platformy multipleksowe Luminex^®, w tym xMAP^® INTELLIFLEX, Luminex^® 200™, FLEXMAP 3D^® i MAGPIX^®.

• W przypadku systemu MAGPIX^® należy wybrać ustawienie "rozszerzone uruchamianie" zamiast zwykłego uruchamiania.
  • Zapewni to prawidłową kalibrację i czyszczenie przed uruchomieniem testu.
  • Praca z surowicą może być bardziej "lepka" niż w przypadku innych płynów biologicznych i może wpływać na wydajność urządzenia, chyba że zostanie ono odpowiednio wyczyszczone.
  • Eksperci Luminex^® mogą dostarczyć zalecany protokół konserwacji.
• Upewnij się, że sonda igłowa jest czysta. Można to osiągnąć poprzez sonikację i/lub płukanie alkoholem.
• Wysokość sondy:
  • xMAP^® INTELLIFLEX System: Dostosuj wysokość sondy w oparciu o typ używanej płytki i umieść dysk wyrównujący lub kulę wyrównującą w studzience zgodnie z protokołem zalecanym przez ekspertów Luminex^®.
  • System Luminex^® 200™: Dostosuj wysokość sondy zgodnie z protokołami zalecanymi przez ekspertów Luminex^® do płytki stałej zestawu przy użyciu 3 dysków wyrównujących.
  • System FLEXMAP 3D^®: Użyj narzędzia do regulacji wysokości sondy (biała płytka), które ma miejsca zarówno dla płytek 384-dołkowych, jak i 96-dołkowych.
        - Wymiary studzienki płytki zestawu 96-dołkowego (3,5 mm) wymagają użycia miejsca F12 na białym narzędziu do regulacji wysokości sondy.
  • System MAGPIX^®: Dostosuj wysokość sondy zgodnie z protokołami zalecanymi przez ekspertów Luminex^® do płytki stałej zestawu za pomocą 2 dysków wyrównujących.
• Notowanie dołków kontrolnych na urządzeniu może być żmudne, z dużą ilością ręcznego wpisywania.
  • Możliwe jest wprowadzenie dołków jako niewiadomych zamiast kontroli, aby uniknąć wpisywania adnotacji dla kontroli, a następnie porównywania z wykresem później.
• Ważne jest, aby używać ustawień bramki określonych przez producenta.
• Oprogramowanie do akwizycji xPONENT^® 200™ systemu Luminex^® ma dwie funkcje: jedną dla kulek magnetycznych (MagPlex^®) i jedną dla kulek niemagnetycznych (MicroPlex^®).
  • Upewnij się, że wybrano kulki MagPlex^®, aby uruchomić zestawy multipleksowe MILLIPLEX^®.
  • Jeśli wybrano niewłaściwy typ, nie trzeba ponownie odczytywać płytki. Partia może zostać odtworzona z poprawionymi ustawieniami protokołu.
• W celu uzyskania informacji na temat oprogramowania xPONENT^® i zamówienia szablonów oprogramowania skontaktuj się z działem pomocy technicznej lub specjalistą ds. sprzedaży.
• Jeśli płytka nie może być uruchomiona natychmiast (w ciągu 4 godzin) (np, musi zostać przewieziona do innego miejsca w celu przeprowadzenia testu), należy zawiesić próbkę w płynie Sheath Fluid PLUS lub Drive Fluid PLUS lub buforze testowym.
• Dziesięć płytek można uruchomić za pomocą jednej butelki płynu Drive Fluid PLUS dla systemu MAGPIX^®.
• Aby zmienić krzywą standardową, na przykład z krzywej 7-punktowej na 8-punktową, wystarczy utworzyć nowy protokół i odtworzyć partię.

Uruchamianie zestawów MILLIPLEX^® na innych urządzeniach Luminex^®

• Systemy Luminex^® 200™, FLEXMAP 3D^® i MAGPIX^® z oprogramowaniem xPONENT^® oraz systemy xMAP^® INTELLIFLEX z oprogramowaniem INTELLIFLEX są wymagane do przeprowadzenia testu multipleksowego MILLIPLEX^®.
  • Jeśli chcesz wypróbować zestaw przed zakupem urządzenia, poproś specjalistę ds. sprzedaży o przeprowadzenie demonstracji przy użyciu platform Luminex^® i zestawów MILLIPLEX^®.
  • Testów z użyciem kulek magnetycznych nie można wykonywać na żadnych urządzeniach wykorzystujących oprogramowanie Luminex^® IS 2.3 lub Luminex^® 1.7.
• Ponieważ wszystkie urządzenia Luminex^® (xMAP^® INTELLIFLEX, Luminex^® 200™, FLEXMAP 3D^® i MAGPIX^® są zbudowane w oparciu o najnowocześniejsze technologie./sup>) są budowane przez Luminex^® Corporation, zestawy MILLIPLEX^® mogą być uruchamiane na każdej z tych maszyn, niezależnie od nazwy nadanej maszynie przez partnera biznesowego Luminex^®.
• Jeśli używane są urządzenia Luminex^® z oprogramowaniem innym niż xPONENT^® (Bio-Plex^® Manager™, MasterPlex^®, STarStation, LiquiChip, LABScan™ 100), należy postępować zgodnie z instrukcjami urządzenia dotyczącymi ustawień bramki i dodatkowymi specyfikacjami producentów oprogramowania do odczytu testów z użyciem kulek magnetycznych Luminex^®.
• Aby odczytać zestaw MILLIPLEX^® na urządzeniu Bio-Plex^®, wybierz 5K-25K dla kulek magnetycznych, w zależności od wersji oprogramowania Bio-Plex^® Manager™.

Instrument Considerations for Running MILLIPLEX^® Assays

Prawidłowe uruchamianie i wyłączanie systemu zapewni jego długą żywotność. Instrukcje dotyczące systemów xMAP^® INTELLIFLEX, Luminex^® 200™ i MAPGIX^® znajdują się w podręcznikach użytkownika tych systemów:

• xMAP^® INTELLIFLEX User Manual, strona 40
• Luminex^® 200™. Podręcznik użytkownika, sekcja 3, strona 17
• FLEXMAP 3D^® Podręcznik użytkownika, strona 30
• MAGPIX^® Skrócona instrukcja obsługi 4.2.

Krótkotrwałe czyszczenie zapobiegnie zatkaniu spowodowanemu próbką, podczas gdy czyszczenie długoterminowe jest ważne, aby zapewnić, że płyn Sheath Fluid PLUS lub Drive Fluid PLUS nie wyparuje i nie skrystalizuje się.

Przygotowanie

• Sprawdź sondę i włóż ją do czytnika. Ustawić wysokość sondy.
• Napełnić zbiorniki (woda Milli-Q^®, 70% EtOH, 0,1M NaOH).
• Ożywić urządzenie: ożywić po przechowywaniu, codzienne uruchamianie.
• Kalibracja i weryfikacja urządzenia: instalacja systemu.
• Przeczytaj cały protokół zestawu.
• Pobierz "Materiały wymagane, ale niedostarczone".
• Potwierdź dokładność pipet.

Test

• Postępuj zgodnie z protokołem zestawu.
• Ustaw projekt eksperymentu w oprogramowaniu do akwizycji.
• Uruchom test.
• Uruchom "Post Batch Routine".

Wyłączenie

• Codzienne wyłączenie (na noc):
  • Uruchom "Clean Routine".
  • Uruchom "Clean Routine".
  • Uruchom "Daily Shutdown Routine".
  • Wyjmij sondę i wyczyść ją w sonikacyjnej łaźni wodnej.
  • Długotrwałe wyłączenie (dłużej niż tydzień):
    • Uruchom "Procedurę czyszczenia" wiele razy.
    • Run "Prepare for Storage" part 1.
    • Prime multiple times with Milli-Q^® water (use a empty sheath fluid container).
    • Run "Prepare for Storage" part 2.
    • Wyjmij sondę i wyczyść ją w sonicznej łaźni wodnej.

   

Wskazówki dotyczące analizy danych

Liczenie kulek

Zalecamy liczenie 50 kulek podczas wykonywania testów MILLIPLEX^®.

• Według ekspertów Luminex^® należy zliczyć co najmniej 35 kulek na region.
• Mniej niż 35 kulek może spowodować przesunięcie wartości MFI (Median Fluorescence Intensity) populacji kulek.
• MFI nie zmieni się dla liczby kulek ≥35.
• Nie martw się, jeśli w jednym regionie jest 35 kulek, a w innych 400. Nie będzie to miało wpływu na MFI.

Procentowy współczynnik zmienności (%CV)

• Wysoki %CV dla wzorców lub próbek może być spowodowany niską liczbą kulek.
• Nasz docelowy %CV wewnątrz testu wynosi < 15%, a nasz docelowy %CV między testami wynosi < 20%.

Obliczanie dolnej granicy oznaczalności (LLOQ) i górnej granicy oznaczalności (ULOQ)

• Definiowanie LLOQ i ULOQ wymaga wąskiej krzywej standardowej (np, seryjne rozcieńczenie 1:2 lub 1:3 do punktu, w którym osiąga się nasycenie na obu końcach).
• Wybierz najniższy i najwyższy punkt krzywej standardowej, który ma odzysk +/- 20%.
• Sprawdź, czy jest to LLOQ i ULOQ, wykonując 5 testów z LLOQ i ULOQ jako próbkami względem krzywej przy użyciu współczynnika seryjnego rozcieńczenia testu, w którym najniższy standard jest poniżej LLOQ, a najwyższy standard jest powyżej ULOQ.
• Precyzja wewnątrz testu powinna mieścić się w granicach 20% dla próbek LLOQ i ULOQ.

Wydajność krzywej/Dopasowanie

• Punkty standardowe %CV powinny wynosić <15%.
  • Wysokie wartości %CV wskazują na zastosowanie niewłaściwej techniki podczas wykonywania rozcieńczeń krzywej standardowej. Przykłady niewłaściwej techniki obejmują:
    
    • Niewirowanie między probówkami.
    • Niewirowanie podczas ładowania płytki.
    • Nie pipetowanie równych ilości do płytki.
  • Im niższe stężenia analitów, tym wyższe są %CV. W przypadku nowych użytkowników poprawia się to z czasem i praktyką.
  • W przypadku punktów standardowych, które mają wysokie %CV, próbki w tym zakresie krzywej powinny być interpretowane z ostrożnością.
  • Alternatywnie, punkt standardowy lub jeden z dołków replikacyjnych może być oznaczony / zamaskowany, chociaż może być trudno zdecydować, który dołek oznaczyć, jeśli uruchamiane są tylko duplikaty.

Odzyskiwanie

• Procent odzysku powinien wynosić 100% +/- 30% (standard branżowy), chociaż niektórzy badacze będą mieli własne kryteria akceptacji.
• Odzyskiwanie procentowe jest zwykle gorsze na obu krańcach krzywej, ale poprawia się to również z czasem i praktyką.
  • W przypadku statystyk krzywej należy skupić się na wartości R², która zbliża się, ale nigdy nie jest równa jedności. (Należy pamiętać, że wartość R² równa "1" jest widoczna przy zaokrągleniu oprogramowania 0,9999).

Minimalne/maksymalne wykrywalne stężenie (minDC/maxDC)

• Dla wielu testów, minDC/maxDC będzie poza punktami standardowymi (ekstrapolowane) ze względu na dobrą wydajność krzywej i dopasowanie.
• Aby uniknąć wyświetlania ekstrapolowanych danych, należy ustawić żądany zakres wykrywania w oprogramowaniu do analizy danych.
  • Decyzja, czy użyć opcji "Best Fit" vs. 5-parametrowa opcja partii zależy od poziomu komfortu, aby określić, jak właściwe jest "bawienie się" dopasowaniem krzywej w celu znalezienia najlepszego.
  • Jeśli próbki wykraczają poza zakres dynamiczny testu, należy je dalej rozcieńczyć odpowiednimi matrycami/mediami i powtórzyć test.

Jak monitorować/uniknąć dryftu od partii do partii

• Punkty standardowe MILLIPLEX^® utrzymują spójne wartości od partii do partii.
• Dryf między partiami jest monitorowany i łagodzony za pomocą porównania pełnej krzywej i porównania względnej siły każdego analitu z partią referencyjną.
• Wszystkie dane są kompilowane w jednej bazie danych, a wykresy trendów są przechowywane w naszej dokumentacji.

Łatwa analiza danych multipleksowych z oprogramowaniem Belysa^® Immunoassay Curve Fitting

Oferujemy potężne połączenie do analizy danych multipleksowych testów immunologicznych, łącząc nasze Belysa^® Immunoassay Curve Fitting software z danymi uzyskanymi za pomocą oprogramowania Luminex^® xPONENT^®. Oprogramowanie Belysa^® umożliwia szybkie i wydajne zarządzanie, śledzenie i analizowanie testów multipleksowych, dając więcej czasu na skupienie się na rozwoju badań. Gromadzenie i analiza danych integruje się płynnie ze wszystkimi urządzeniami Luminex^® xMAP^®.

• Krok 1: Przeciągnij i upuść plik .csv uzyskany z oprogramowania do akwizycji xPONENT^®.
  • Oprogramowanie Belysa^® akceptuje pliki akwizycji ze wszystkich instrumentów RUO Luminex^®. Pliki można przeciągnąć do otwartej przeglądarki, aby otworzyć je na platformie Belysa^®.
• KROK 2: Zbadaj i automatycznie zoptymalizuj dopasowanie krzywej dla swoich danych.
  • Narzędzia Belysa^® przeanalizują surowe dane i przedstawią je użytkownikowi, dodając do krzywej adnotacje z punktami standardowymi, kontrolnymi i próbkami. Dzięki prostej funkcji kreatora oprogramowanie zapewni najlepsze dopasowanie do uzyskanych danych. Dostępna jest również opcja ręcznego dopasowania krzywej.
• Krok 3: Skanowanie danych w celu zapewnienia higieny replikacji.
  • Oprogramowanie Belysa^® powiadamia użytkownika na dwa sposoby:
    
    • Narzędzia Belysa^® ostrzegają użytkownika o danych, które znajdują się na dolnym końcu zakresu testu (np, poniżej granicy oznaczalności lub niewykrywalne).
    • Narzędzia Belysa^® sygnalizują również błędy techniczne w teście, zarówno na poziomie surowych danych (takich jak liczba kulek), jak i w obliczonych parametrach (takich jak odzysk lub %CV).
• Krok 4: Porównanie krzywych standardowych z poprzednim eksperymentem w celu potwierdzenia podobieństwa matematycznego.
  • Porównanie nachylenia krzywych standardowych między partiami lub seriami zapewnia, że różne zestawy działają jednakowo, zarówno w ramach serii, jak i w trakcie badania podłużnego. Użytkownik najpierw wybiera krzywą do ustalenia jako odniesienie, z którym porównywane są kolejne krzywe testu. Jeśli obliczony współczynnik nachylenia jest równy 1, wówczas krzywe są statystycznie podobne.
• Krok 5: Eksport danych.
  • Każdy tryb eksperymentalny w oprogramowaniu oferuje nieco inną strukturę raportu, pojedynczy analit i wiele analitów. Są one dostępne w formacie .csv, .txt, Excel i PDF do przyszłej analizy lub prowadzenia dokumentacji.

Dowiedz się więcej o oprogramowaniu Belysa^® w naszym artykuł Monitorowanie odtwarzalności metod immunologicznych.

Zapytaj o informacje

Masz więcej pytań dotyczących testów multipleksowych MILLIPLEX^®? Sprawdź nasze Pytania lub wypełnij formularz klikając na poniższy przycisk..

Wyłącznie do użytku badawczego. Nie do użytku w procedurach diagnostycznych.