MESC 20

NOTE: Both the cell line and DNA from the cell line may be available for this product. Please choose -1VL or VIAL for cells, or -DNA-5UG for DNA.

• Synonim(y): MESC-20, MESC20
• Kod UNSPSC: 41106514

Właściwości

• pochodzenie biologiczne: mouse embryo
• opakowanie: tube of 5 μg 11120814-DNA-5UG; pkg of vial of cells 11120814-1VL
• tryb wzrostu: Adherent
• kariotyp: XY, diploid
• morfologia: Adherent monolayer of spheroidal cells.
• receptory: Not specified

Opis

Pochodzenie linii komórkowej

Embrionalne komórki macierzyste myszy

Opis linii komórkowej

Komórkowa linia zarodkowa MESC 20 została utworzona z wewnętrznej masy komórkowej 3,5-dniowego męskiego przedimplantacyjnego zarodka myszy (szczep 129/Olac). Te pluripotencjalne komórki zachowują zdolność do uczestniczenia w normalnym rozwoju embrionalnym. Różnicowanie komórek jest hamowane przez czynnik hamujący białaczkę (LIF). Dodanie LIF umożliwia hodowlę bez użycia warstwy podajnika.

Profil DNA

Not specified

pożywka hodowlana

Pożywka MEF składa się z DMEM/F12, 10% FBS, 2 mM L-glutaminy (G7513) i 0,1 mM 2-merkaptoetanolu (M6250). Podłoże KSR składa się z DMEM, 20% Serum Replacer, 2 mM L-glutaminy (G7513), NEAA, 0.1 mM 2-Mercaptoethanol (M6250) i 1000 jednostek/ml LIF.

Rutyna subkultury

Linie MESC mogą być hodowane bez użycia komórek zasilających inaktywowanych mitotycznie (Brown et al., 1992 PMID: 1483967). Jednak komórki dostarczone przez Sigma zostały wyhodowane na pierwotnych mysich fibroblastach embrionalnych poddanych działaniu mitomycyny, aby zapewnić utrzymanie komórek w stanie niezróżnicowanym. Można stosować mysie fibroblasty zarodkowe, STO (numer produktu Sigma 86032003) lub SNL 76/7 (numer produktu Sigma 07032801). W ECACC plastikowe naczynia są wstępnie powlekane żelatyną przed umieszczeniem w nich komórek zasilających. Żelatyna świńska (Sigma G1890) jest rozpuszczana w sterylnej wodzie (0,5 g/500 ml) w temperaturze 56◦C. Roztwór 0,1% jest sterylizowany przez filtrację (0,22 μm). Dodać 0,1% żelatynę do plastikowego naczynia, aby przykryć dno i inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej. Usunąć żelatynę, przemyć raz PBS i zastąpić odpowiednim podłożem hodowlanym. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia kolby/kieliszka. Warstwy pożywki są przygotowywane na zżelatynowanych kolbach z co najmniej 24-godzinnym wyprzedzeniem. Ampułka jest rozmrażana w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość jest szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę MEF dodaje się kroplami do 5 ml. Komórki są odwirowywane z prędkością 150 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej (RT). Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki MEF. Komórki są liczone i dodawane do kolb zawierających odpowiednią pożywkę w ilości 1-3 x^{104 komórek/cm2}. Ampułka z komórkami ES jest rozmrażana w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość jest szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę KSR dodaje się kroplami do objętości 5 ml. Komórki odwirowuje się z prędkością 150 x g przez 5 minut. Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki KSR. Przygotowaną kolbę zasilającą przepłukuje się raz PBS i dodaje pożywkę KSR. Komórki ES należy umieścić w ilości 4-5 x^{104 komórek/cm2}. Hodowle należy inkubować w nawilżanym 5%_CO2/95% powietrzem inkubatorze w temperaturze 37 °C. Codziennie należy wymieniać 100% pożywki i pasażować komórki co 2-3 dni. Kolonie nie mogą stykać się ze sobą, ponieważ nadmierny wzrost spowoduje różnicowanie.

Inne uwagi

W przypadku przesyłek w regionie Azji i Pacyfiku mogą obowiązywać dodatkowe opłaty za transport i obsługę. Więcej informacji można uzyskać u lokalnego przedstawiciela działu obsługi klienta.

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.