ES-R1-EGFP D4/XEGFP

07072006, mouse embryo. Monolayer of spheroidal cells on feeder layer of PMEFs.

• Synonim(y): B5/EGFP, ES-R 1, ES-R-1, ESR-1, ESR1
• Kod UNSPSC: 41106514

Właściwości

• Nazwa produktu: ES-R1-EGFP D4/XEGFP, 07072006
• pochodzenie biologiczne: mouse embryo
• opakowanie: tube of 5 μg 07072006-DNA-5UG; pkg of vial of cells 07072006-1VL
• tryb wzrostu: Adherent
• kariotyp: Not specified
• morfologia: Adherent monolayer of spheroidal cells on feeder layer of mouse primary embryonic fibroblasts
• produkty: Not specified
• receptory: Not specified
• metody: cell culture | mammalian: suitable
• Warunki transportu: dry ice

Opis

Pochodzenie linii komórkowej

Embrionalne komórki macierzyste myszy, ekspresja GFP

Opis linii komórkowej

Pluripotencjalna linia mysich embrionalnych komórek macierzystych wyrażająca GFP. Ten wariant zielonej fluorescencji został wygenerowany przez losową integrację transgenu EGFP do ES-R1 (numer produktu Sigma 07072001) przy użyciu ko-elektroporacji z selektywnym markerem zawierającym wektor pPGK Puro. Wektor jest napędzany przez natychmiastowy wczesny wzmacniacz CMV sprzężony z promotorem beta-aktyny kurczaka i pierwszym intronem.

pożywka hodowlana

Podłoże MEF składa się z Advanced DMEM/F12, 10% FBS / FCS (F2442), 2 mM L-glutaminy (G7513) i 0,1 mM 2-merkaptoetanolu (M6250). Podłoże KSR składa się z DMEM, 20% Serum Replacer, 2 mM L-glutaminy (G7513), NEAA (M7145), 0,1 mM 2-Mercaptoethanol (M6250) i 1000 jednostek/ml LIF.

Rutyna subkultury

Embrionalne komórki macierzyste (ES) wymagają użycia mitotycznie inaktywowanych komórek zasilających w celu wsparcia wzrostu komórek macierzystych w stanie niezróżnicowanym. Można stosować mysie fibroblasty embrionalne, STO (numer produktu Sigma 86032003) lub SNL 76/7 (numer produktu Sigma 07032801). W ECACC plastikowe naczynia są wstępnie powlekane żelatyną przed umieszczeniem w nich komórek zasilających. Żelatyna świńska (numer produktu Sigma G1890) jest rozpuszczana w sterylnej wodzie (0,5 g/500 ml) w temperaturze 56 °C. Roztwór 0,1% jest sterylizowany przez filtrację (0,22 μm). Dodać 0,1% żelatynę do plastikowego naczynia, aby przykryć dno i inkubować przez 20 minut w temperaturze pokojowej (RT). Usunąć żelatynę, przemyć raz PBS i zastąpić odpowiednim podłożem hodowlanym. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia kolby/kieliszka. Warstwy pożywki są przygotowywane na zżelatynowanych kolbach z co najmniej 24-godzinnym wyprzedzeniem. Ampułka jest rozmrażana w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość jest szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę MEF dodaje się kroplami do 5 ml. Komórki są odwirowywane z prędkością 150 x g przez 5 minut w temperaturze RT. Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki MEF. Komórki są liczone i dodawane do kolb zawierających odpowiednią pożywkę w ilości 1-3 x^{104 komórek/cm2}. Ampułka z komórkami ES jest rozmrażana w łaźni wodnej o temperaturze 37°C, a jej zawartość jest szybko przenoszona do 15 ml probówki wirówkowej. Pożywkę KSR dodaje się kroplami do objętości 5 ml. Komórki są odwirowywane z prędkością 150 x g przez 5 minut. Komórki są ponownie zawieszane w 5 ml pożywki KSR. Przygotowaną kolbę zasilającą przepłukuje się raz PBS i dodaje pożywkę KSR. Komórki ES należy umieścić w ilości 4-5 x^{104 komórek/cm2}. Hodowle należy inkubować w nawilżanym 5%_CO2/95% powietrzem inkubatorze w temperaturze 37 °C. Codziennie należy wymieniać 100% pożywki i pasażować komórki co 2-3 dni. Kolonie nie mogą stykać się ze sobą, ponieważ nadmierny wzrost spowoduje różnicowanie.

Inne uwagi

W przypadku przesyłek w regionie Azji i Pacyfiku mogą obowiązywać dodatkowe opłaty za transport i obsługę. Więcej informacji można uzyskać u lokalnego przedstawiciela działu obsługi klienta.

Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności

Ta linia komórkowa ma specjalne warunki dopuszczenia: Organizacje komercyjne są zobowiązane do wypełnienia formularza "Zezwolenie na uwolnienie linii komórkowej do celów badawczych w organizacjach komercyjnych".

Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.