HTS092M
ChemiSCREEN EP3 Przygotowanie błony receptora prostanoidowego
Human EP3 GPCR membrane preparation for Radioligand binding Assays & GTPgammaS binding.
Zaloguj sięWyświetlanie cen organizacyjnych i kontraktowych
About This Item
Kod UNSPSC:
41106514
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.41
pochodzenie biologiczne
human
Poziom jakości
rekombinowane
expressed in Chem-1 cells
producent / nazwa handlowa
ChemiScreen
Chemicon®
metody
ligand binding assay: suitable (GTPγS)
radioligand binding assay (RLBA): suitable
numer dostępu NCBI
numer dostępu UniProt
Warunki transportu
dry ice
informacje o genach
human ... PTGER3(5733)
Opis ogólny
Pełnej długości ludzki PTGER3 cDNA kodujący wariant splicingowy 6 EP3
Prostanoidy wiążą się z rodziną 8 GPCR, wywierając swoje działanie biologiczne (Narumiya i FitzGerald, 2001). Prostaglandyna PGE2 powoduje ból, rozszerzenie naczyń krwionośnych, immunosupresję limfocytów T, resorpcję kości i promowanie karcynogenezy. Cztery pokrewne receptory GPCR, EP1, EP2, EP3 i EP4, wiążą się z PGE2, ale różny status sprzężenia z białkiem G każdego receptora prowadzi do różnych efektów biologicznych. Dalsza różnorodność jest generowana przez alternatywny splicing; ludzki gen dla EP3 generuje 9 alternatywnie splicowanych mRNA kodujących 8 izoform EP3 (Kotani i in., 1997). Te izoformy EP3 różnią się sekwencją na ich C-końcach i różnią się zdolnością do łączenia się z Gs, Gq lub Gi (Kotani i in., 1995). EP3 jest wymagany do gorączki indukowanej przez pirogeny, odpowiedź od dawna przypisywana prostaglandynom przez przeciwgorączkowe działanie aspiryny i innych inhibitorów COX (Ushikubi i in., 1998). Preparaty błonowe EP3 firmy Chemicon są surowymi preparatami błonowymi wykonanymi z naszych zastrzeżonych stabilnych rekombinowanych linii komórkowych w celu zapewnienia wysokiego poziomu ekspresji powierzchniowej GPCR; dlatego są idealnymi narzędziami HTS do badań przesiewowych antagonistów interakcji EP3 i jego ligandów. Preparaty błonowe wykazują Kd 1,56 nM dla [3H]-PGE2. Przy 1,5 nM [3H]-PGE2, preparaty membranowe EP3 o stężeniu 5 µg/dobę i 10 µg/dobę zazwyczaj dają odpowiednio ponad 10- i 20-krotny stosunek sygnału do tła.
Zastosowanie
Test wiązania radioligandu i wiązanie GTPS.
Działania biochem./fizjol.
GPCR Class: A
Protein Target: EP3
Target Sub-Family: Prostanoid
Jakość
Signal:background and specific binding values obtained in a competition binding assay with varying amounts of EP3 membrane prep:
Specifications:
1 unit = 10 μg
Bmax: 15.0 pmol/mg
Kd: 1.56 nM
| 10 µg/well | 5 µg/well | |
|---|---|---|
| Signal:Background | 38 | 21 |
| Specific Binding (cpm) | 6,386 | 4,053 |
Specifications:
1 unit = 10 μg
Bmax: 15.0 pmol/mg
Kd: 1.56 nM
Charakterystyka techniczna
Warunki indukcji
Membrany są mieszane z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla badanych stężeń) w buforze wiążącym na niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubowane przez 1-2 h. Przed filtracją 96-dołkowa płytka filtracyjna GF/C jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 min, a następnie przemywana 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5% BSA. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i przemywana 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) buforem do przemywania. Płytka jest suszona i liczona.
Bufor wiążący: 50 mM Tris, pH 7,4, 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Radioligand:[3H] PGE2 (Perkin Elmer#:NET-428 )
Bufor płuczący: 50 mM Tris, pH 7,4, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Membrany są mieszane z radioaktywnym ligandem i nieznakowanym konkurentem (patrz rysunki 1 i 2 dla badanych stężeń) w buforze wiążącym na niewiążącej 96-dołkowej płytce i inkubowane przez 1-2 h. Przed filtracją 96-dołkowa płytka filtracyjna GF/C jest powlekana 0,33% polietylenoiminą przez 30 min, a następnie przemywana 50 mM HEPES, pH 7,4, 0,5% BSA. Reakcja wiązania jest przenoszona na płytkę filtracyjną i przemywana 3 razy (1 ml na studzienkę na przemywanie) buforem do przemywania. Płytka jest suszona i liczona.
Bufor wiążący: 50 mM Tris, pH 7,4, 10 mM MgCl2, 1 mM EDTA, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Radioligand:[3H] PGE2 (Perkin Elmer#:NET-428 )
Bufor płuczący: 50 mM Tris, pH 7,4, filtrowany i przechowywany w temperaturze 4°C.
Postać fizyczna
Jedno opakowanie zawiera membrany wystarczające na co najmniej 200 testów (jednostek), gdzie jednostka to ilość membrany, która da ponad 10-krotny stosunek sygnału do tła ze znakowaną 3H PGE2 przy 1,5 nM.
Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko błonowe dostosowano do 0,5 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C.
Płyn w buforze opakowaniowym: 50 mM Tris pH 7,4, 10% glicerol i 1% BSA bez konserwantów.
Metoda pakowania: Białko błonowe dostosowano do 0,5 mg/ml w 1 ml buforu do pakowania, szybko zamrożono i przechowywano w temperaturze -80°C.
Przechowywanie i stabilność
Przechowywać zamrożone w temperaturze -70°C przez okres do 2 lat. Nie zamrażać i nie rozmrażać.
Informacje prawne
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Oświadczenie o zrzeczeniu się odpowiedzialności
Unless otherwise stated in our catalog or other company documentation accompanying the product(s), our products are intended for research use only and are not to be used for any other purpose, which includes but is not limited to, unauthorized commercial uses, in vitro diagnostic uses, ex vivo or in vivo therapeutic uses or any type of consumption or application to humans or animals.
Ta strona może zawierać tekst przetłumaczony maszynowo.
Kod klasy składowania
12 - Non Combustible Liquids
Klasa zagrożenia wodnego (WGK)
WGK 2
Temperatura zapłonu (°F)
Not applicable
Temperatura zapłonu (°C)
Not applicable
Certyfikaty analizy (CoA)
Poszukaj Certyfikaty analizy (CoA), wpisując numer partii/serii produktów. Numery serii i partii można znaleźć na etykiecie produktu po słowach „seria” lub „partia”.
Masz już ten produkt?
Dokumenty związane z niedawno zakupionymi produktami zostały zamieszczone w Bibliotece dokumentów.
M Kotani et al.
Molecular pharmacology, 48(5), 869-879 (1995-11-01)
Five distinct cDNA clones encoding four different isoforms of human prostaglandin (PG) E receptor EP3 subtype were isolated from a human kidney cDNA library. Two cDNA clones differed only in their 3'-untranslated regions. The four isoforms, tentatively named EP3-I, EP3-II
F Ushikubi et al.
Nature, 395(6699), 281-284 (1998-09-29)
Fever, a hallmark of disease, is elicited by exogenous pyrogens, that is, cellular components, such as lipopolysaccharide (LPS), of infectious organisms, as well as by non-infectious inflammatory insults. Both stimulate the production of cytokines, such as interleukin (IL)-1beta, that act
M Kotani et al.
Genomics, 40(3), 425-434 (1997-03-15)
Prostaglandin EP3 receptor subtype is a seven-membrane-spanning protein with multiple C-terminal tails generated by alternative mRNA splicing. We report here the structural organization of the human EP3 gene (PTGER3). The human EP3 gene spanned more than 80 kb and was
Genetic and pharmacological analysis of prostanoid receptor function.
S Narumiya et al.
The Journal of clinical investigation, 108(1), 25-30 (2001-07-04)
Nasz zespół naukowców ma doświadczenie we wszystkich obszarach badań, w tym w naukach przyrodniczych, materiałoznawstwie, syntezie chemicznej, chromatografii, analityce i wielu innych dziedzinach.
Skontaktuj się z zespołem ds. pomocy technicznej