Amicon^® Ultra 원심분리 필터를 이용한 신속 항체 농축

서론

면역글로불린을 위한 정제 프로토콜에는 단백질 A 또는 G 크로마토그래피 배지에 대한 친화성 결합, 비결합 단백질 세척, 낮은 pH 버퍼를 이용한 용리가 포함됩니다. 정제된 항체의 결과물은 흔히 다운스트림 연구나 장기간 보관으로 인해 과도하게 희석됩니다. 투석은 많은 경우에 항체 농축 및/또는 단백질 항체 활성도를 보존하는 버퍼 교환을 필요로 합니다. Ultrafiltration 는 최대 99% 면역글로불린 회수율과 원스텝 소금 제거로 같은 결과를 더 빨리 달성합니다(농축, 탈염 및 버퍼 교환 프로토콜을 확인하십시오).

방법 및 결과

Prosep^® A 및 Prosep^® G Montage^® 항체 정제 키트 그리고 Amicon^® Ultra-15mL 원심분리 필터를 사용한 토끼 IgG의 정제 및 농축.

A. Montage^® 키트를 이용한 IgG 정제

1. 10mL의 결합 버퍼로 Prosep^® A 또는 Prosep^® G 레진을 평형 상태로 만들고 500xg에서 5분 동안 회전시킵니다.
2. 혈청 시료를 0.22µm Steriflip^® GP 필터에 투과시켜 정화합니다.
3. 시료를 결합 버퍼 A와 1:1로 희석하고 100~150xg에서 20분 동안 장치를 원심분리합니다.
4. 비결합 오염물질을 제거하기 위해 스핀 컬럼을 20mL의 결합 버퍼 A로 세척하고 500xg에서 5분 동안 컬럼을 원심분리합니다.
5. 10mL의 용리 버퍼 B2를 중화 버퍼 1.3mL가 들어있는 새로운 원심분리 튜브에 추가하여 시료를 용리합니다.
6. 280nm에서 UV 흡광도와 같은 적절한 농축법을 사용하여 시료의 총 단백질 농도를 측정합니다.

B. Amicon^® Ultra-15 30kDa MWCO 장치를 사용한 IgG 농축

1. 중화 및 용리된 분획을 Amicon^® Ultra 15mL 30kDa MWCO 장치에 추가합니다.
2. 시료가 원하는 농도에 도달할 때까지 4000xg에서 스윙 버킷 로터 또는 5000xg에서 고정 앵글 로터로 10~20분 동안 원심분리합니다.