Amicon^® Ultra 원심분리 필터를 이용한 소변 농축

소변 내 특정 단백질의 정확한 측정은 질병을 진단하고 관리하는 데 중요합니다. 그렇지만 소변 단백질의 농도는 흔히 임상 검사의 검출 한계에 미치지 못합니다. Amicon^® Ultra-4mL 10kDa MWCO 장치는 임상 실험실 분석을 하기 전에 소변 시료를 농축하기 위해 사용될 수 있습니다.

방법

Amicon^® Ultra-4mL 10kDa MWCO 필터를 이용한 소변 시료 내 유리 면역글로불린 경쇄(Bence-Jones 단백질)의 농축.

1. 24시간 내 요검체에서 총 단백질을 측정합니다.
2. Amicon^® Ultra-4mL 장치를 소변 4mL로 채웁니다.
3. 3400xg에서 30~45분간 원심분리합니다(약 25~50μL의 원심분리된 시료를 획득할 때까지). 이는 최초 시료 농도에서 160배 증가된 농도에 해당합니다.
4. 피펫 팁을 필터 기기의 바닥 안으로 삽입하여 농축된 시료를 회수합니다.
5. 경쇄를 정량하고 기타 단백질을 식별하기 위해 농축물에 아가로스 전기영동법을 수행합니다. 소변 내 구성 성분의 총량에 대한 경쇄의 백분율을 측정합니다. 그런 뒤 경쇄의 백분율에 총 24시간 단백질 농도(24시간 부피당 그램)를 곱합니다.
6. 경쇄 식별을 위해 농축물에 면역고정 전기영동법을 수행합니다.

Centricon®(C) 및 Amicon® Ultra(A) 원심분리 농축 장치로 농축된 소변 시료 내 유리 면역글로불린 경쇄(Bence-Jones 단백질)의 전기영동 해상도 결과물. 각 레인에서 약 25kDa에 있는 어두운 밴드는 이러한 단백질을 나타냅니다.

추가 참고사항

1. 정상적인 비균질 면역글로불린은 면역고정 전기영동법으로 소변 농축물에서도 확인될 수 있습니다. 이 "래더 효과"는 미세이질성 경쇄로 이루어져 있습니다. Bence-Jones 단백질은 이 래더 내에 존재할 수 있습니다. Bence-Jones 단백질의 존재를 검증하려면 2차원 전기영동법으로 추가 분석을 해야 합니다.
2. 과다한 항원이 존재하는 경우, 항원(Bence-Jones 단백질)과 항체가 평형을 이룰 때까지 농축물을 희석해야 합니다.

관련 제품

1. Amicon^® Ultra 장치는 유사한 분석을 위해 혈청, 혈장, 뇌척수액의 농축에도 사용될 수 있습니다. 질병이 있는 환자에서 얻은 유리 경쇄를 아가로스 전기영동법으로 검출하려면 약 20mg/mL로 농축해야 합니다. 면역고정 전기영동법에 의한 검출은 아가로스 전기영동법보다 10배 더 민감합니다.
2. 정적 농축기(Minicon^® 장치)도 소변 내 Bence-Jones 단백질 농축에 사용될 수 있습니다.

감사의 말

이 프로토콜에서 소변 농축을 위해 Amicon^® Ultra 장치를 이용한 연구는 텍사스주 보몬트에 소재한 Helena 실험실에서 Mark Merchant 박사가 수행하였습니다.

참고문헌

1. N. T. Clinical Guide to Laboratory Tests, 2nd ed. Philadelphia: Saunders, WB; 1990;362–363..

2. Kahn SN. 1991. Dear Dr. [Bence] Jones... 37(9):1557-1558. https://doi.org/10.1093/clinchem/37.9.1557

3. July 2002.. Cleveland Clinic homepage. Accessed .

4. Christenson RH, Behlmer P, Howard JF, Winfield JB, Silverman LM. 1983. Interpretation of cerebrospinal fluid protein assays in various neurologic diseases.. 29(6):1028-1030. https://doi.org/10.1093/clinchem/29.6.1028

5. Christenson RH, Tucker JA, Allen E. 1985. Results of dipstick tests, visual inspection, microscopic examination of urine sediment, and microbiological cultures of urine compared for simplifying urinalysis.. 31(3):448-451. https://doi.org/10.1093/clinchem/31.3.448