Kapa Biosystems Taq DNA 중합효소 및 PCR 키트

DNA 추출 및 증폭에 사용되는 Taq DNA 중합효소 PCR 시약 및 키트

DNA 추출 및 증폭은 분자 생물학 워크플로우에 매우 중요한 단계이며, 여기에는 보통 정제된 고품질의 DNA가 필요합니다. Kapa Biosystems는 다양한 포유류 및 식물 기반 유전 물질을 추출하고 증폭하는 데 사용되는 DNA 중합효소 시약 및 PCR 키트의 강력한 포트폴리오를 제공합니다. 혁신적인 내열성 중합효소를 통합한 Kapa Biosystems 시약 및 키트는 다양한 응용 분야에 대해 향상된 감도와 특이성으로 다음 발견을 수행할 수 있도록 설계되었습니다.

• KAPA Taq DNA 중합효소
• KAPA2G Fast Multiplex
• KAPA2G Robust DNA 중합효소
• KAPA Long Range PCR 시스템
• KAPA Mouse Genotyping
• KAPA Express Extract
• KAPA3G Plant PCR 키트

KAPA Taq DNA 중합효소

일상적인 PCR을 위한 고품질의 성능을 제공합니다.

KAPA Taq DNA 중합효소는 단일 서브유닛에 기반을 둔 호열성 세균 테르무스 아쿠아티쿠스(thermophilic bacterium Thermus aquaticus)의 야생형(wild-type) Taq DNA 중합효소입니다. KAPA Taq 및 KAPA Taq 핫스타트 DNA 중합효소는 5'~3' 중합효소와 5'~3' 핵산말단 분해효소(exonuclease) 활성을 가지고 있지만 3'-5' 핵산말단 분해효소 교정(proofreading) 활성은 없습니다. 효소는 2.2 x 10⁵ 뉴클레오티드 합성당 대략 1회의 오류가 발생합니다.

KAPA Taq DNA 중합효소 키트는 다음 용도에 이상적입니다.

• 표준 PCR
• DNA 표지
• DNA 시퀀싱
• 고품질, 내열성 DNA 중합효소가 필요한 수많은 응용 분야가 있습니다.

다음과 같은 장점이 있습니다.

• 향상된 감도, 특이성 및 수율
• 새로운 버퍼 제재는 특정 프라이머 어닐링을 가능하게 하여 특정 제품의 수율을 높입니다.

그림 1. CCR5 유전자 500 bp 절편은 100 ng, 10 ng, 1 ng 또는 100 pg의 인간 유전체 DNA를 템플릿으로 사용하여 증폭되었습니다. KAPA Taq HotStart는 경쟁사의 HotStart 제품과 비교 시 향상된 감도, 특이성 및 수율을 보여줍니다. 모든 반응은 제조업체의 권장 프로토콜을 사용하여 수행되었습니다.

그림 2. 270 bp 앰플리콘은 KAPA Taq 또는 KAPA Taq 핫스타트를 사용하여 마이코플라스마 DNA에서 증폭되었습니다. 감도는 DNA 1 ng으로 시작하는 10X 템플릿 희석 제품으로 테스트되었습니다.

KAPA2G FAST MULTIPLEX

멀티플렉스 PCR에 빠른 속도와 높은 성능을 제공합니다.

KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트는 유도 진화 과정을 통해 유래된 2세대(2G) 효소를 포함합니다. KAPA2G FAST 핫스타트 DNA 중합효소는 더 높은 진행도 및 속도를 위해 가공된 항체 매개형 핫스타트 제형으로 야생형 Taq DNA 중합효소보다 훨씬 빠른 확장 속도를 제공합니다. 속도와 더불어, KAPA2G Fast는 고도로 다중화된 PCR에 사용되는 competitor 효소 대비 향상된 수율 및 감도를 제공합니다.*

KAPA2G FAST Multiplex는 다음 기능을 제공합니다.

• 모든 엠플리콘에 대한 균일한 표현
• GC 함량이 높은 까다로운 표적으로 성공적인 멀티플렉스 PCR 가능
• PCR 주기를 최대 60 % 단축
• 15초 정도로 낮은 신장(extension) 시간
• 성능에 영향을 미치지 않는 빠른 속도
• 마스터 믹스(master mix) 제형으로 최적화 단계 최소화

그림 3. *Multiplex PCR(8-플렉스)은 KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트, Competitor Q 및 Competitor I로 수행되었습니다. 반응(25 μL)에는 1X PCR Master Mix(KAPA 및 Competitor Q) 또는 1X PCR 버퍼, 3 mM MgCl2, 각 dNTP 0.2 mM 및 핫스타트 Taq DNA 중합효소 1 U(자체 제작한 멀티플렉스 시약, Competitor I 포함)가 포함되었습니다. 인간 유전체 DNA를 템플릿으로 사용했으며(반응당 250 ~ 2 ng) 프라이머는 각각 0.2 μM로 공급되었습니다. 주기는 제조업체의 권장 사항(30 주기)에 따라 적용되었습니다.

그림 4. *Multiplex PCR(12-플렉스)은 KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트, Competitor Q 및 Competitor I로 수행되었습니다. 복잡한 다중 분석에서 모든 앰플리콘에 대한 균일한 표현을 획득하기란 앰플리콘의 길이와 2차 구조 및 프라이밍 효율의 차이에서 비롯된 증폭 편향(amplification bias) 때문에 매우 어렵습니다. 반응(25 μL)에는 1X PCR Master Mix(KAPA 및 Competitor Q) 또는 1X PCR 버퍼, 3 mM MgCl2, 각 dNTP 0.2 mM 및 핫스타트 Taq DNA 중합효소 1 U(자체 제작한 멀티플렉스 시약, Competitor I 포함)가 포함됩니다. 인간 유전체 DNA를 템플릿으로 사용했으며(반응당 250 ~ 2 ng) 프라이머는 각각 0.2 μM로 공급되었습니다. 주기는 제조업체의 권장 사항(30 주기)에 따라 적용되었습니다.

그림 5. KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트를 사용한 Fast Multiplex PCR입니다. 와일드형 Taq를 포함하는 Multiplex PCR은 멀티플렉스의 모든 프라이머에 대한 프라이머 어닐링(annealing)과 신장(extension)을 위해 일반적으로 긴 어닐링 및 신장 시간이 필요합니다. KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트와 Competitor Q Multiplex PCR 키트(와일드형 Taq DNA 중합효소 포함)를 사용하는 4-플렉스, 8-플렉스 및 12-플렉스 멀티플렉스 PCR(30주기, 제조 업체 권장 사항에 따른 설정)에 필요한 총 PCR 사이클 수를 보여줍니다. KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트로 40~60 % 시간 절감이 가능합니다.

그림 6. GC 함량이 높은 Multiplex PCR(6-플렉스)은 KAPA2G Fast Multiplex PCR 키트, Competitor Q 및 Competitor I로 수행되었습니다. 와일드형 Taq를 사용한 Multiplex PCR은 동일한 효율로 증폭될 수 있는 쉽고 간단한 표적으로 제한됩니다. 가공된 KAPA2G Fast DNA 중합효소의 향상된 진행도(processivity)를 통해 광범위한 까다로운 표적에 대해 균일한 멀티플렉스 PCR을 수행할 수 있습니다. 반응(25 μL)에는 1X PCR Master Mix(KAPA 및 Competitor Q) 또는 1X PCR 버퍼, 3 mM MgCl2, 각 dNTP 0.2 mM 및 핫스타트 Taq DNA 중합효소 1 U(자체 제작한 시약, Competitor I 포함)가 포함되었습니다. 인간 유전체 DNA를 템플릿으로 사용했으며(반응당 250 ~ 2 ng) 프라이머는 각각 0.2 μM로 공급되었습니다. DMSO(5 %) 및 KAPA 강화제 1(1X)이 모든 반응에 추가되었습니다. 주기는 제조업체의 권장 사항(30 주기)에 따라 적용되었습니다. 앰플리콘 크기는 241 ~ 642 bp, GC 함량은 72.7 ~ 83.8 %입니다.

KAPA2G ROBUST DNA 중합효소

KAPA2G Robust DNA 중합효소는 광범위한 앰플리콘 유형을 통틀어 일관성 없는 증폭(GC 함량 또는 AT 함량이 높은) 문제를 해결하기 위해 개발되었습니다. 이 제품을 통해 더 향상된 진행도 및 특이적 활성이 가능하며, 이는 다른 말로 강력한 PCR 성능, 고감도 및 일반 억제제에 대한 내성 향상을 의미합니다. 이와 같은 고성능 키트는 까다로운 PCR 애플리케이션 및 샘플에 이상적으로 적합하며 다양한 효소 및 프로토콜이 사용되는 최적화가 필요하지 않습니다.

KAPA2G Robust DNA 중합효소는 다음 분야에 제공됩니다.

• 단위 효소당 더 높은 수율이 요구되는 애플리케이션
• 콜로니 PCR
• 억제제 캐리오버에 대한 내성 및 미가공 샘플 PCR(예: FFPE)
• 핫스타트 또는 Readymix 제형을 사용하는 일상적인 PCR

GC 함량 및 AT 함량이 높은 표적의 효율적인 증폭:

• GC 함량 및 AT 함량이 높은 광범위한 템플릿을 통틀어 강력한 성능 제공
• PCR 성공율 향상

그림 7. 본 연구에 사용된 96개 프라이머 세트 중 72개를 사용해 얻은 각 PCR 제품의 절반은 1 % TBE 아가로스 겔에서 전기영동되었습니다. 각 합성 겔 이미지의 왼쪽 상단에는 가장 낮은 GC 함량(27 %, 파란색)을, 오른쪽 하단에는 가장 높은 GC 함량(84 %, 빨간색)을 적용하여 GC 함량이 늘어나는 순서로 앰플리콘이 로드되었습니다. 본 연구를 위해 선정된 프라이머는 프라이머 길이, 시퀀스 구성, 이론상 녹는점 및 여러 설계 특성을 변수로 가집니다. 일부 프라이머에는 M13 또는 기타 표준 시퀀싱 프라이머를 사용하여 PCR 이후 시퀀싱을 하기 위해 5'-테일이 포함되었습니다. A. KAPA2G Robust HotStart ReadyMix 반응(25 μL)은 사용자 가이드에 따라 수행되었습니다. B. 와일드형 Taq 반응(25 μL, 반응당 0.5 U Taq 포함)은 Taq 반응 버퍼(1.5 mM MgCl2, 1배율)에서 KAPA2G Robust와 동일한 최종 프라이머와 dNTP 농축액을 사용하여 수행되었습니다.

모든 반응에는 25 ng의 인간 유전체 DNA가 포함되었습니다. GC 함량이 70 % 이상인 앰플리콘을 대상으로 하는 모든 반응(KAPA2G Robust 및 Taq)에 5 % DMSO가 포함되었습니다.

일반적인 PCR 억제제에 대해 내성 향상

• 미가공 샘플에서 효율적인 증폭
• 단위 효소당 더 높은 수율 및 감도 제공

그림 8. KAPA2G Robust 핫스타트 PCR 키트와 와일드형 핫스타트 Taq 중합 효소를 사용하여 4개의 일반 PCR 억제제가 있는 상태에서 1 pg 플라스미드 DNA로부터 1.5 kb 절편을 증폭합니다. 모든 반응에는 25 μL 반응당 0.5 단위 효소가 포함되었습니다. SDS를 함유한 반응에 KAPA2G Robust 핫스타트 버퍼 B가 전체적으로 사용되었으며 KAPAEnhancer 1이 추가되었습니다. 주기(Cycling)는 모든 효소에 대해 어닐링 온도가 64 ºC이고 사이클당 신장 시간이 1.5분인 표준 3단계 사이클링 프로파일(35사이클)을 사용하여 Eppendorf Mastercycler epgradient S로 수행되었습니다.

콜로니 PCR에서 뛰어난 성능

• 대장균 및 효모 세포에서 직접 추출한 PCR의 높은 수율과 향상된 일관성

그림 9. KAPA2G Robust 핫스타트(위) 또는 와일드형 Taq(아래)를 사용하여 일반적으로 사용되는 4가지 대장균 균주(DH5a, DH10B, JM109 또는 BL21)에서 복제된 2.7 kb 삽입물의 증폭입니다. 콜로니(LB-agar + Amp 플레이트에서 성장)는 독립적인 PCR 반응에서 직접 재현탁(resuspended)되었거나(왼쪽) 또는 PCR 등급의 물에서 먼저 재현탁된 다음에 PCR 반응 혼합물에 추가되었습니다(중간). 야간(overnight) 배양(LB + Amp로 제조)의 경우 PCR 혼합물(오른쪽)에 1 μL를 직접 첨가했습니다.

그림 10. KAPA2G Robust 핫스타트(위) 또는 와일드형 Taq(아래)를 사용하여 일반적으로 사용되는 3가지 S. 세레비제균 균주(BY4742, FY23, W303)에서 얻은 GSH1 유전자에서 2.5 kb(왼쪽) 또는 1.6 kb(오른쪽) 절편에 대한 증폭입니다. 콜로니(YPD-한천 플레이트에서 얻음) 또는 YPD 야간 배양은 NaOH 또는 Zymolase(표시된 바에 따라)로 50 μL 부피에서 처음으로 용해되었습니다.

KAPA LONG RANGE PCR 시스템

KAPA Long Range PCR 시스템은 Taq DNA 중합효소와 교정 기능을 가진 가공된 고세균(B군) DNA 중합효소의 혼합물입니다. 이러한 2중 효소 시스템은 긴 범위 및/또는 민감한 PCR을 지원하도록 특별히 설계되었으며 Taq 중합효소보다 3~4배 높은 충실도를 가집니다. 핫스타트 제형에서 KAPA Long Range는 첫 번째 변성(denaturation) 단계까지 효소를 비활성화하는 독점 항체와 결합되어 가짜 증폭 생산물을 제거하고 반응 효율과 감도를 향상시킵니다.

KAPA Long Range PCR 키트는 다음 분야에 이상적으로 적합합니다.

• 소량의 템플릿 DNA를 사용하는 긴 표적 및 또는 PCR에 대한 PCR 증폭
• 표준 단기(short-range) 및 중기(mid-range) PCR 증폭
• 3'-T-돌출부 클로닝 벡터 결찰(ligation)에 사용되는 PCR 생산물의 생산

다음과 같은 장점이 있습니다.

• 최대 15 kb의 고감도 및 특이성을 가진 표적 증폭
• 소량 DNA 입력에 높은 수율 제공
• competitor 장기(long-range) 시스템에 문제가 발생한 경우 높은 수율, 향상된 감도 및 특이성을 보여줌*

그림 11. 25 μL당 50 ng, 10 ng, 2 ng, 400 pg으로 시작하는 인간 유전체 DNA의 템플릿 희석 증폭입니다. 앰플리콘의 길이는 737 bp, 1.3 kb, 3.3 kb 및 4.5 kb였습니다. 35 주기, 72ºC 확장 온도로 적용되었습니다.

그림 12. 25 μL당 50 ng, 10 ng, 2 ng, 400 pg으로 시작하는 인간 유전체 DNA의 템플릿 희석 증폭입니다. 앰플리콘의 길이는 7.5 kb, 10.5 kb, 13 kb 및 15 kb였습니다. 35 주기, 68ºC 확장 온도로 적용되었습니다.

그림 13. *25 μL 반응당 인간 유전체 DNA 50 ng, 10 ng, 2 ng 및 400 pg에서 4.5 kb 절편을 증폭합니다. 레인: (M) 표지, (1 ~ 4) KAPA Long Range HotStart, (5 ~ 8) Competitor T, (13 ~ 16) Competitor R

KAPA MOUSE GENOTYPING

1시간 내 꼬리에서 형체까지 이동합니다.

KAPA Mouse Genotyping 키트는 쥐 조직에서 DNA 절편을 1시간 만에 안정적으로 추출하고 증폭할 수 있도록 설계되었으며, 이는 기존 프로토콜의 소요 시간이 하루 이상이었던 것과 대비됩니다. 키트에는 새로운 항온성 단백질 분해효소 및 버퍼 시스템인 KAPA Express Extract가 포함되어 있으며 이를 통해 단 15분 만에 쥐 조직에서 PCR 준비된 DNA를 추출할 수 있습니다. 또한 염료가 포함된 KAPA2G Fast Genotyping Mix는 직접 진화를 통해 조작된 DNA 중합효소를 포함하고 있어 뛰어난 진행도와 최고 속도를 제공합니다.

KAPA Mouse Genotyping 키트는 다음을 제공합니다.

• 15분간의 추출로 유기용매, pH 중화, 원심분리의 필요성 제거
• 뛰어난 진행도 및 고속으로 45분간 증폭
• 핫스타트 및 이외 제형 모두에 염료 로딩이 포함된 편리한 마스터 믹스 형식

미가공 추출 방법을 능가하는 성능과 상용 키트

• 처리 시간 및 특이성 증가
• 비용 절감

그림 14 및 15. Quanta Mouse Genotyping 키트 대비 KAPA Mouse Genotyping 키트는 멀티플렉스 PCR에서 더 향상된 감도와 수율 및 특이성을 보여줍니다. 반응은 50°C 또는 60°C에서 어닐링되어 유전자형 분석에 대해 부최적화 어닐링 온도 사용 효과를 입증했습니다.

처리량 증가, 총처리 시간 및 신뢰성 향상

• 15분 만에 생성된 PCR-ready DNA
• 최소한의 취급으로 샘플 손실 또는 오염 위험 감소
• 다중 분석을 위한 충분한 템플릿, 96웰 형식의 샘플을 취급할 수 있도록 쉽게 확장 가능
• 광범위한 앰플리콘 길이 및 GC 함량 전체에 대해 빠르고 신뢰할 수 있는 DNA 절편 증폭

그림 16 및 17. A) DNA 추출 및 증폭에 필요한 총 소요 시간은 KAPA Mouse Genotyping 키트, 단백질효소 K 및 야생형 Taq 그리고 알칼리 분해와 야생형 Taq를 사용하여 비교되었습니다. B) KAPA Mouse Genotyping 키트(1)로 생성된 5개의 앰플리콘(312~915 bp)에 대한 결과를 일반적으로 사용되는 두 가지 방법(2 및 3)으로 얻은 결과와 비교했습니다. KAPA Mouse Genotyping 키트를 사용하여, 빠른(15분) 단일 튜브 KAPA Express Extract 시스템으로 쥐 꼬리에서 DNA 용해물을 준비했습니다. 염료가 포함된 KAPA2G Fast 핫스타트 ReadyMix를 사용한 증폭은 45분 만에 완료되었습니다. 반면, DNA 용해물은 최대 3.5시간 동안 단백질 분해효소 K 프로토콜(2) 또는 빠른 (최대 2.5시간) 알칼리 분해 방법(3)으로 준비되었습니다. 두 가지 경우 모두 야생형 Taq(1.5시간 주기 프로토콜)로 증폭이 수행되었습니다. KAPA Mouse Genotyping 키트로 얻은 결과는 완료까지(정확한 DNA 추출 프로토콜 사용에 따라) 최소 4배 또는 최대 1일이 걸릴 수 있는 다른 방법으로 얻은 결과와 비교할 때 같거나 더 좋습니다(특이성이 더 높습니다).

KAPA EXPRESS EXTRACT

빠르고 효율적인 DNA 추출

KAPA Express Extract는 PCR-ready DNA를 단 15분 만에 추출할 수 있는 새로운 항온성 단백질 분해효소 및 버퍼 시스템입니다. DNA 추출이 단일 튜브에서 편리하게 수행되어 샘플 손실 및 오염 위험을 크게 줄일 수 있습니다. KAPA Express Extract와 KAPA2G Robust 핫스타트 ReadyMix의 조합으로 빠른 DNA 추출과 일관된 다운스트림 증폭을 위한 고성능 솔루션을 제공합니다.

KAPA Express Extract는 다음 기능을 제공합니다.

• 까다로운 시료 유형에서 15분 만에 PCR-ready DNA로 일관된 다운스트림 증폭을 제공하는 신속한 추출 프로토콜
• 구강 면봉, 모낭, 어류 조직, 조류 깃털을 포함한 다양한 샘플 및 조직 유형에서 성공적인 DNA 추출을 위해 최적화된 다목적 키트
• 단일 튜브 반응으로 오염 위험 최소화
• "구트리(Guthrie)" 카드, FTA® Elute 카드 및 FTA 카드에서 효율적으로 추출

그림 18 및 19. DNA는 포유류와 물고기에서 얻은 다양한 샘플에서 KAPA Express Extract를 사용하여 추출되었습니다. 각 추출물에서, 종 식별에 일반적으로 사용되는 최대 650 bp 시토크롬 c 산화효소 I 유전체 절편에 대해 KAPA2G Robust 핫스타트 ReadyMix와 프라이머가 포함된 PCR에서 2 μL가 직접(정량화 없이) 사용되었습니다(Ivanova 외, 2007). PCR 생산물(10 μL)은 1 % 아가로스 겔에서 분석되었습니다. 샘플 원산지 및 유형이 겔 위에 표시됩니다. 반응 생성물은 중첩되지 않는 M13 프라이머(10 μL 염기서열 반응당 2 μL PCR 생성물)를 사용한 표준 생어(Sanger) 염기서열 반응에 직접 사용되었습니다. 시퀀스 데이터는 고품질이었고 각 종에 대해 식별할 수 있었습니다. 부시리(Seriola lalandi, Yellowtail amberjack) 조직의 시퀀스 추적 섹션이 하단 패널에 표시됩니다.

그림 20. DNA 추출물은 KAPA Express Extract를 사용하여 두 개의 서로 다른 FFPE 샘플에서 제조되었습니다. 각 추출물은(정량화 없이) EGFR 유전자(엑손 18~21 및 24에 해당)의 5가지 서로 다른 절편(293 bp ~ 1 kb)에 대해 KAPA2G Robust 핫스타트 ReadyMix 및 프라이머가 포함된 다양한 PCR에서 직접 사용되었습니다. 결과는 동일한 반응과 사이클링 조건을 사용하여 얻은 결과와 비교되었으며, 다른 점은 정제된 인간 유전체 DNA 1 ng을 템플릿으로 사용했습니다. 기존의 샘플에서 1 kb의 엑손 24 단편을 제외하면, 수율 및 반응 효율은 FFPE DNA 추출물과 정제된 유전체 DNA 간에 유사했습니다. 샘플 1에서 만들어진 PCR 생성물은 1:10으로 희석하여 표준 생어(Sanger) 염기서열 반응에 직접 사용되었습니다. 고품질의 시퀀스 데이터(하단 패널, 샘플 1 엑손 19 절편)를 얻을 수 있었습니다. 화살표가 표시된 위치에서 시작된 혼합 시퀀스는 검체 1을 채취한 환자에서 진단된 비소세포암과 관련된 15-nt 결실이 있다는 것을 확인했습니다.

그림 21. HLA-B*27 대립 유전자를 검출하기 위해 다양한 혈액 시료 유형에서 DNA를 추출하고 증폭합니다. KAPA Express Extract(위쪽 패널)를 사용하여 인간 EDTA 혈액 샘플 12개로부터 DNA를 추출했습니다. 각 추출물 2 μL는 KAPA2G Robust 핫스타트 ReadyMix와 두 개의 프라이머 세트를 함유한 25 μL PCR에 직접 첨가되었습니다. 내부 통제 프라이머 세트는 베타 글로빈 유전자의 429 bp 절편을 표적으로 하는 반면, 두 번째 프라이머 세트는 시퀀스별 방식으로 HLA-B*27 자리의 141 bp 절편을 표적으로 합니다. 12개 샘플 중 2개에서 강직성 척추염(ankylosing spondylitis)과 관련된 HLA-B*27 대립 형질에 양성 반응을 보였습니다. 레인 C-와 C+는 각각 HLA-B*27 음성 및 양성 대조군(템플릿으로 인간 유전체 DNA 1 ng 사용)을 나타냅니다. HLA-B*27 양성(+) 또는 음성(-)으로 확인된 개인의 혈액이 점철된 "구트리(Guthrie)" 카드, 즉 FTA 카드 또는 FTA 용리(Elute) 카드(하단 패널)로부터 DNA를 추출했습니다. DNA 추출 및 증폭 조건 및 대조군(C- 및 C+)은 상단 패널의 경우와 동일합니다.

KAPA3G PLANT PCR 키트

KAPA3G Plant PCR 키트는 식물에서 유래한 DNA의 PCR을 위해 정제된 DNA 또는 미가공 추출된 DNA 중 한 가지를 활용하도록 설계되었습니다. 키트에는 폴리페놀 및 다당류와 같은 일반적인 식물 유래 PCR 억제제에 대한 내성을 개선하도록 설계된 KAPA3G DNA 중합효소가 포함되어 있습니다.

KAPA3G Plant PCR 키트는 다음 기능을 제공합니다.

• 잎 디스크, 씨앗 및 미가공 식물 추출물과 같은 식물 조직에서 직접 추출하는 신속한 PCR
• 유전자 변형 스크리닝을 위한 워크플로우 간소화
• PCR 성공률 및 재현성 향상

워크플로우 간소화 및 소요 시간 단축

• 야생형 효소 대비 절반으로 단축된 PCR 수행 시간
• 시간이 많이 걸리는 DNA 추출 불필요
• 직접 PCR에 적합함

그림 22. KAPA3G Plant PCR 키트를 사용하는 직접 PCR은 야생형 Taq를 사용하는 표준 PCR보다 훨씬 짧은 소요 시간으로 CTAB 추출 및 표준 PCR보다 성능이 우수합니다.

미가공 샘플과 정제된 DNA에서 긴 표적 증폭

• 절편을 최대 5 kb까지 증폭
• 높은 수율과 특이성

그림 23. 길이가 다른 표적(담배 추출 297 bp와 4100 bp, 토마토 추출 640 bp, 포도 덩굴 추출 1221 bp, 감자 추출 1448 bp와 2249 bp)은 KAPA3G Plant PCR 키트를 사용하여 정제된 DNA(+) 또는 잎 디스크(L)로부터 증폭되었습니다. 각각의 식물 종에 대해 상용 DNA 정제 키트를 사용하여 유전체 DNA를 정제했습니다. 0.5 mm 직경의 Harris Uni-Core™ 샘플링 도구를 사용하여 미가공 물질을 샘플링했습니다. 정제된 DNA(반응당 1~10 ng, 종별로 다양함)와 미가공 샘플은 50 μL PCR에서 템플릿으로 사용되었으며, 증폭 주기는 40회였습니다. 반응 생성물은 1 % 아가로스 겔에서 분석되었습니다. KAPA Express DNA Ladder(100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp)는 MW 표지로 사용되었습니다.

다양한 식물 종과 조직 유형에서 직접 PCR 수행

• 잎 디스크 또는 씨앗을 템플릿으로 사용하는 직접 PCR
• 시간이 많이 걸리는 DNA 추출이 필요하지 않음

그림 24. 식물 유전체 DNA는 상용 DNA 정제 키트를 사용하여 모든 종으로부터 정제되었습니다. Harris Uni-Core™ 샘플링 도구(직경 0.5 mm)를 사용하여 잎(모든 종) 또는 씨앗(담배 및 애기장대()Arabidopsis)을 샘플링했으며, 이를 위해 반응당 분쇄된 씨앗을 하나씩 사용했습니다. PCR(50 μL)은 미가공 샘플 또는 정제된 DNA(1~10 ng, 종별로 다양)를 포함하고 있으며, 모든 경우에서 40 사이클로 수행되었습니다. 표적의 범위는 500~900 bp였으며, 반응 생성물은 1 % 아가로스 겔에서 분석되었습니다. KAPA Express DNA Ladder(100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp)는 MW 표지로 사용되었습니다.

새로운 미가공 샘플 식물 PCR 워크플로우로 성공률 향상

• 추출 버퍼를 사용하여 단 5분 만에 식물 PCR을 위한 미가공 추출물 제조
• 가장 까다로운 시료 유형에서도 높은 성공률

그림 25. Tab c/d 프라이머 쌍을 포함하는 미가공 샘플 PCR은 8가지 식물의 잎 및/또는 씨앗으로 수행되었으며, 열처리 없이 1 μL의 미가공 추출물을 준비하거나(왼쪽) 열처리로 1 μL의 미가공 추출물을 준비했습니다(오른쪽). 반응은 KAPA3G Plant PCR 키트 TDS에 설명된 바와 같이 설정되었으며, PCR 45 사이클은 55°C에서 어닐링되었고, 사이클당 72°C에서 20초 신장(extension)을 수행했습니다. KAPA Express DNA Ladder(100, 200, 400, 800, 1600, 4000, 8000 bp)는 MW 표지로 사용되었습니다. 1: 유칼립투스, 2: 포도 덩굴, 3: 밀 잎, 4: 밀 종자, 5: 카놀라 잎, 6: 카놀라 종자, 7: 벼 종자, 8: 보리 종자, 9: 옥수수 알, 10: 목화씨, 11: 목화잎.