공정 및 제품 불순물
mAb 제조 공정에는 생체요법에 대한 개발 프로그램을 방해할 수 있는 공정 또는 제품의 오염물질을 포함하여 많은 불순물이 존재하거나 생성됩니다. 다행히 당사는 개발 주기의 모든 단계의 데이터 요구 사항을 지원하고 R&D 및 GMP 환경에서 분석을 진행한 다년간의 경험을 갖추고 있습니다. 최첨단 계측과 신속한 처리를 바탕으로 프로젝트 추진에 도움이 되는 신뢰할 수 있는 결과를 제공합니다.
공정 불순물 평가
당사는 다음 공정 불순물 검사 요구 충족을 위해 공정 오염물질, 숙주 세포 단백질과 DNA, 그리고 공정 첨가물를 비롯한 검사 제품군을 제공합니다.
숙주 세포 오염물질: mAb 제조 종정의 공정 불순물은 의약품의 발현에 사용되는 숙주 세포에서 발생할 수 있습니다. 생체요법에 ppm 수준으로 존재하는 숙주 세포 단백질(HCP) 불순물질은 환자에게 예측 불가능한 면역 반응 발생이 가능한 주요 면역원성 위험 요소입니다. 이러한 불순물의 복잡하고 다양한 특성으로 인해 탐지나 모니터링이 어렵습니다. 잔류하는 숙주 DNA에 대한 허용 기준은 보통 매우 낮은 수준(통상적으로 의약 성분 물질 mg당 DNA 1.0 pg 미만)에서 설정되므로, 효과적인 제거 기법과 민감한 탐지 방법이 매우 중요합니다.
제조 첨가물: mAb 개발 및 제조 공정 중 사용되는 다양한 제조 첨가물을 모니터링할 필요가 있습니다. 여기에는 세제, 단백질 A, 트랜스펙션 시약(transfection reagent), 항생제, 발포방지제(anti-foam agents) 및 성장 촉진 인자가 포함됩니다.
미생물 집합(Microbial battery): 빠른 성장률과 높은 생산량을 얻기 위해 많은 mAb가 생산되기 때문에 미생물 오염물의 존재를 모니터링하고 제어하는 것이 중요합니다. 내독소라고 불리는 그람 음성균의 세포벽 구성 요소는 발열과 오한 등의 가벼운 증상에서 치명적인 패혈성 쇼크에 이르는 다양한 반응을 일으킵니다. 따라서 mAb에서 이를 제거하는 것은 매우 중요할 뿐만 아니라 규제 요건이기도 합니다. 생균수 검사는 mAb 제조 공정 전체에서 이루어지며 무균 검사 또한 mAb 생산의 무결성을 보고하기 위해 중요합니다.
제품 불순물 평가
아래의 제품 불순물 관련 검사 요구를 충족하기 위한 당사의 제품 오염물 검사 제품군은 크기 변형, 전하 변형 또는 미생물학(생존 또는 비생존)에 따라 구성되어 있습니다.
전하 분포: 제조 공정 중 PTM(post-translational modifications)의 결과에 따라 또는 정제 및 저장 전반에 걸친 화학적 변형으로 인해 발생하는 전하 변형(charge variants)은 mAb의 생물학적 활성 및 약물 동태에 상당한 영향을 미칠 수 있습니다. 전하 변형 분석은 mAb에 대한 규제 요구 사항이며, 양이온 교환 크로마토그래피(CEX) 및 모세관 등전초점(CIEF)을 포함하는 기술을 사용하고 있습니다.
크기 분포: 초기 생산 원료에는 보통 경쇄(light chain)로 나타나는 응집체, 절편 및 생체 분자와 같은 크기 변형이 포함되어 있습니다. 이들은 면역원성과 효능에 영향을 미칠 가능성이 있기 때문에, 존재 여부를 모니터링하는 것이 중요합니다. 크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 크기 분포를 평가하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 방법이며 동적 광 산란(DLS) 및 모세관 전기 영동 나트륨 황산염(CE-SDS)과 같은 기법도 매우 유용하게 사용됩니다.
분자량 분석: 분자량은 mAb 식별의 주요 지표이며, 경쇄(light chain) 및 중쇄(heavy chain) 특성 및 PTM(post-translational modification)에 의해 영향을 받습니다. 일반적으로 온전한 질량(IM) 분석으로 평가하는 mAb 분자량은 단백질 이질성의 주요 원인 중 하나를 제거하기 위해 중쇄(heavy chain) 구조를 데글리코실화(deglycosylating)하여 분석할 수도 있습니다.
서열 지도화(Sequence mapping): mAb 식별을 결정하기 위해 널리 사용되는 염기서열 지도화(Sequence mapping) 기술은 단일 효소 펩타이드 지도의 생성에서 충돌 활성화된 분해(collisionally activated dissociation, CDA)의 데이터 의존 획득(data-dependent acquisition, DDA)과 같은 훨씬 복잡한 분석에 이르기까지 다양하게 사용됩니다. 이러한 정보는 N 말단 또는 C 말단 염기 서열이나 단자 시퀀싱 또는 이온 이동성 질량분석기(ion mobility spectrometry)를 사용하여 향상시킬 수 있습니다.
형태 변화 분석: 제조 공정 중에 발생하는 모든 형태 변화를 이해하고 제어하는 것은 일관된 mAb 제품을 생성하는 데 도움이 됩니다. 예를 들어, N글리칸 매핑(N-glycan mapping)을 통해 mAb 안정성, 생체 활동성 및 면역원성에 대한 정보를 알수 있으며, 시알산 정량화(sialic acid quantification)는 과도한 시알릴화(sialylation)를 방지하는 데 중요합니다. 제조 중 유도된 이황화물 감소는 mAb 수확 시 수율 감소로 이어지는 것으로 알려져 있으므로 이황화물 지도화(disulfide mapping)를 실시하는 것이 좋습니다.
물리 속성 검사: 제조 과정 중 mAb의 여러 가지 물리적 속성에 대한 검사가 필요합니다. 여기에는 pH, 농도 및 중량몰삼투압농도가 포함되며, 이러한 모든 것들은 일관된 의약품 제조를 위한 필수적인 특성입니다.
불순물 검사요구 사항에 대한 논의 및 향후 생체요법 지정을 위한 다음 단계를 진행하려면 아래 양식을 작성하십시오.
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