-硫酸アンモニウムが反応に干渉するおそれがある場合:
- 酵素を冷蔵庫から取り出します。注記:硫酸アンモニウム懸濁液は冷凍しないことを強くお勧めします。
- キャップがしっかりと閉まっていることを確認してから、バイアル/ボトルを数回反転させて懸濁液を白濁させます。これには1分程度かかります。ボルテックスや超音波処理はしないでください。このような過酷な処理は、酵素の一部を変性させるおそれがあります。
- ピペットと滅菌の広口径ピペットチップを使用して、懸濁液の一部を取り出します。
- 清潔な微小遠心管(使用する容量が多い場合は遠心管)へ移します。
- 約10,000~15,000 x gで10分間遠心分離して、酵素をペレット状にします。できれば、2℃~8℃で冷蔵保存した微小遠心セットを使用してください。
- できるだけ透明な上清を慎重に取り出して、保持します。硫酸アンモニウム溶液をすべて取り出す必要はありません。
- 適量の反応バッファーを添加してペレットを溶解します。
- 上清とペレットから得られた溶液を分析し、タンパク質含有量および/または酵素活性を調べます。
-硫酸アンモニウムが反応に干渉しない場合:
- 上記のステップ1~3に従います。
- この一部を反応バッファーに直接添加します。
硫酸アンモニウム懸濁液に対しては、ほとんどの酵素は固形になることに留意してください。硫酸アンモニウム溶液中には、ごくわずかな量の酵素しか存在しないと考えられます。
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