カチオン性脂質／オリゴマー複合体の調製手順－Avanti^® Polar Lipids

原理

脂質調製の通常手順：DNA複合体では、カチオン性脂質を水性バッファーに懸濁し、超音波処理して小さなベシクルを形成する必要があります。カチオン性脂質ベシクルは、DNA水溶液と脂質：DNAの重量比10：1で混合し、所定の時間インキュベートします。このインキュベーション中、正電荷を持つリポソームが会合してDNA表面をコーティングして、DNAに細胞膜との相互作用を促進し、細胞膜を通して移動するカチオン性脂質層が得られると考えられています。アンチセンスDNAなどの小さなDNA断片やオリゴマーについては、DNA粒子は通常、脂質粒子よりかなり小さくなります。この場合、脂質はDNAをコーティングせず、むしろDNAがリポソームの表面をコーティングします。これは、重要なリポソームと細胞表面の相互作用を妨げ、膜を介した移動を阻害する働きをします。これらの小さなDNA粒子を効果的にコーティングするため、脂質をモノマー（または小さな凝集体）のかたちでDNAに提示する必要があります。これは、脂質を有機溶媒に溶解し、その有機溶媒をDNAの水溶液に分散させるか、脂質とDNAを一緒に有機溶媒中でインキュベートすることで達成できます。最適な溶媒はエタノールです。水に混和でき、懸濁液に溶媒が残留したとしても生体系に対して無毒であるからです。

手順A（エタノール脂質溶液：オリゴマー水溶液）

1. カチオン性脂質をエタノールに溶解します。
   • 脂質サンプルがクロロホルム中で保存されている場合、乾燥窒素または乾燥アルゴンを使ってクロロホルムを蒸発させ、脂質残留物を真空システムに1時間置いて残留クロロホルムを除去します。
   • 乾燥した脂質残留物にエタノールを加え、適度に加熱（40～50°C）しながら、必要に応じて超音波処理を用いて、完全に溶解します。
   • オリゴマー水溶液に添加された脂質エタノール溶液の体積が水溶液の体積の10%になるように濃度を調整します。
2. オリゴマーを適量の水性バッファーに溶かします。
3. 脂質：オリゴマーの重量比が10：1になるように、このオリゴマー水溶液に脂質エタノール溶液を加えます。
   • 脂質：オリゴマー懸濁液をボルテックスまたは超音波処理を用いて完全に混合します。
   • 懸濁液を5～10分間インキュベートして、脂質：オリゴマー複合体を形成させます。
   • 残留エタノールが望ましくない場合には、懸濁液を40～50°Cまで加熱して、エタノールが除去されるまで窒素ガスを通気させます。

手順B（エタノール脂質溶液：オリゴマーエタノール溶液）

1. カチオン性脂質をエタノールに溶解します。
   • 脂質サンプルがクロロホルム中で保存されている場合、乾燥窒素または乾燥アルゴンを使ってクロロホルムを蒸発させ、脂質残留物を真空システムに1時間置いて残留クロロホルムを除去します。
   • 乾燥した脂質残留物にエタノールを加え、適度に加熱（40～50°C）しながら、必要に応じて超音波処理を用いて、完全に溶解します。
2. オリゴマーを適量のエタノールに溶かします。
3. 2つのエタノール溶液を、脂質：オリゴマーの重量比が10：1になるように混合します。
   • 脂質：オリゴマー懸濁液をボルテックスまたは超音波処理を用いて完全に混合します。
   • 懸濁液を5～10分間インキュベートして、脂質：オリゴマー複合体を形成させます。
   • 乾燥窒素、乾燥アルゴン、ロータリーエバポレーターなどを使ってエタノールを蒸発させ、脂質残留物を真空システムに1時間置いて残留エタノールを除去します。
4. 脂質：オリゴマー複合体を水性バッファーに再懸濁し、超音波処理して分散させます。