X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬のプロトコルとトラブルシューティング

製品番号 SITRAN-RO

プロトコル

初代肺線維芽細胞トランスフェクションにおけるsiRNA

Rocheはこの用例に関するデータを保有していませんが、あるお客様からの報告内容を以下のように簡単にまとめています。

fibroblast growth factor 2（FGF2）と、 luciferase GL2に対する非特異的siRNAまたはFGF2に対する特異的siRNAのいずれかを含むプラスミドを使用することで、野生のラット肺線維芽細胞が正常にコトランスフェクトされました。1 µgの核酸に対する9 µLのX-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬を使用しました。
トランスフェクションの66時間後に細胞を回収し、ウエスタンブロッティングで分析しました。β-アクチンの発現レベルをローディングコントロールとして使用しました。
siRNA GL2でトランスフェクトされたサンプルは、FGF2およびβ-アクチンの発現レベルを低下させませんでした。FGF2特異的siRNAは、FGF2の発現レベルの45%の低下を誘発しました。
これらの結果が示すとおり、X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬を使用して、プラスミドとsiRNAを一次細胞に効率的にトランスフェクト（およびコトランスフェクト）することが可能です。

トランスフェクトされた細胞マイクロアレイ上のsiRNA、リバースTRおよび発現プラスミド

X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬を使用して、トランスフェクトされた細胞マイクロアレイ上でsiRNAと発現プラスミドをトランスフェクトすることが可能です。

実験プロトコルの詳細は、Biochemicaの記事『Efficient Reverse Transfection of both siRNA and Expression Plasmids on Transfected Cell Microarrays Using X-tremeGENE™ siRNA Transfection Reagent』に記載されています。

トラブルシューティング

沈殿物

DNAを添加すると、X-tremeGENE™ siRNAトランスフェクション試薬によるものではない沈殿物が生じる場合があります。沈殿物の形成の原因としては、DNAサンプル中の塩濃度が高いことが考えられます。Genopureプラスミドキットを使用してDNAを精製することをお勧めします。