P4390

Polynucleotide Kinase from T4-infected Escherichia coli

10 units/μL, buffered aqueous glycerol solution

• CAS番号: 37211-65-7
• Enzyme Commission number: 2.7.1.78 (BRENDA, IUBMB)
• MDL番号: MFCD00166009
• UNSPSCコード: 12352204
• NACRES: NA.53

特性

• グレード: for molecular biology
• 形状: buffered aqueous glycerol solution
• 分子量: 33 kDa
• 濃度: 10 units/μL
• その他の活性: Endonuclease and exonuclease, none detected
• 輸送温度: wet ice
• 保管温度: −20°C

詳細

アプリケーション

用途:

• 5′末端標識によるシ-クエンシングまたは核酸タギング(DNAおよびRNA)。
• オリゴヌクレオチドの5′末端リン酸化。
• ホスホリルポリヌクレオチドからの 3′リン酸基の除去。

構成

T4 Polynucleotide Kinase is supplied in a solution of 50% glycerol (v/v), 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 25 mM KCl, 2mM DTT, 0.1 mM EDTA, and 0.1 μM ATP.

原理

ポリヌクレオチドキナ-ゼは、ATPのγ位リン酸を、1本鎖・2本鎖核酸(DNA・RNA)や3′ヌクレオシド一リン酸の、5′水酸基末端へ転移させる「正反応」を触媒します。本酵素はまた、5′末端リン酸基とATP間において、ADPを介した交換反応を触媒します。さらに本酵素は3′-ホスファタ-ゼ活性があり、ホスホリルポリヌクレオチドから3′-リン酸基を除去します。
1.正反応法: [γ-³²P]-ATPの標識γリン酸が、基質の5′-水酸基へ転移します。
5′-HO-DNA + [γ-³²P]-ATP → 5′-³²PO-DNA + ADP
基質に遊離の5′-水酸基が存在しない場合、事前にアルカリホスファタ-ゼによる脱リン酸化が必要です。
2.交換反応法:まず、基質の5′-末端リン酸が、反応混合液中のADPへ転移します。 次に、[γ-³²P]-ATPから、標識γ-リン酸が基質の遊離水酸基に転移します。
5′-PO-DNA + ADP → 5′-HO-DNA + ATP
5′-HO-DNA + [γ-³²P]-ATP → 5′-³²PO-DNA + ADP

単位の定義

1 unitは、37°C、30分間に、1 nmolの³²Pを小球菌ヌクレアーゼ処理DNAの5'末端に移行する反応を触媒する酵素量です。移行は、酸不溶性物質への取り込みにより検出されます。

アナリシスノート

Activity is determined in a reaction mixture containing 40 mM Tris-HCl (pH 7.5), with 10 mM MgCl2, 5 mM dithiothreitol, 0.5 mM 5′-OH polynucleotide ends, and mM [γ-32P]-ATP.

安全性情報

• ピクトグラム: GHS08
• シグナルワード: Danger
• 危険有害性情報: H334
• 注意書き: P261 - P284 - P501
• 危険有害性の分類: Resp. Sens. 1
• 保管分類コード: 10 - Combustible liquids
• WGK: WGK 3
• 引火点(°F): Not applicable
• 引火点(℃): Not applicable
• 個人用保護具 (PPE): Eyeshields, Gloves, multi-purpose combination respirator cartridge (US)