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DIG-High Prime

sufficient for 40 labeling reactions, pkg of 160 μL, solution

• 別名: DIGシステム
• UNSPSCコード: 41105500

特性

• 形状: solution
• 品質水準: 100
• 使用法: sufficient for 40 labeling reactions
• 包装: pkg of 160 μL
• メーカー／製品名: Roche
• 環境により配慮した代替製品の特徴: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• 環境により配慮した代替製品カテゴリ: Aligned,
• 保管温度: −20°C

詳細

詳細

DIG-High Prime は、ジゴキシゲニン-11-dUTP による DNA の急速ランダムプライムラベリング用の酵素とヌクレオチドの混合物です。この方法では、プライマーとしてランダムオリゴヌクレオチドの3′-OH末端を使用するKlenow ポリメラーゼにより、変性DNA の相補的なDNA 鎖を合成します。DIG標識プローブは、1時間以内または一晩のインキュベーション後に高収率で生成されます。

メルクは、グリーン・ケミストリーの12原則の1つ以上に則った、より環境に配慮した製品（グリーン代替品）をお客様にお届けできるよう最善の努力をします。この製品はさらに安全な化学品として設計されます。  DIGシステムは、核酸のラベリングと検出に放射能を使用することに代わる高感度で費用対効果の高い手段として確立されました。DIGシステムの汎用性を証明する入手可能な出版物は数多くあります。そのため、放射性ラベリングの使用は、もはやハイブリダイゼーションのDNAラベリングの唯一の選択肢ではありません。

特異性

熱失活：2μL 0.2 M EDTA（pH 8.0）を添加することにより、および／または 65°Cで 10 分間加熱することにより反応を停止させます。

アプリケーション

DIG-High Prime-標識DNAプローブは、さまざまなハイブリダイゼーション法に使用されています：

• サザンブロット
• ノーザンブロット
• ドット／スロットブロット
• 遺伝子ライブラリーのスクリーニング
• In situ ハイブリダイゼーション

検出システムの特異性および感度が高いため、DIG標識DNAプローブは、1μgのヒト総DNA中の単一コピー遺伝子検出のために使用することができます。ジゴキシゲニン機能基とスペーサーアームとがアルカリに不安定なエステル結合をしている DIG-dUTP（アルカリ不安定性）を使用すると、より簡単かつ効率的にブロットを剥離および再プローブすることができます。

特徴および利点

DIG-High Prime を使用すれば、以下の効率的なラベリングが保証されます：

• 標準的な反応の場合、DNA 量は 10 ng から 3μg の範囲にあります。
• 小さい制限酵素断片からλに及ぶ異なる長さの DNA またはコスミド DNA
• スーパーコイル状または線状の DNA
• 低融点アガロース中の DNA。

ラべリング効率：
新たに合成されるジゴキシゲニンラベル DNA として、1μg のテンプレートによる 1 時間の標準的なラベリング反応により 0.8μg が得られ、また+37°Cで 20 時間のインキュベーションにより 2μg が得られます。

内容物
5 倍濃縮ランダムプライマー混合物：1 U/ μL Klenow ポリメラーゼ（ラベリンググレード）、1 mM dATP、1 mM dCTP、1 mM dGTP、0.65 mM dTTP、0.35 mM DIG-11-dUTP（アルカリ不安定性）の 50%（v/v）グリセロール溶液。

品質

機能検査：
1μg の直鎖状の pBR 328 を用いた標準的アッセイでは、1 時間後に 0.8μg の DIG ラベル DNA、20 時間後に 2.3μg の DIG ラベル DNA が合成されます。このラベルされた DNA を 20 ng/mL の濃度でハイブリダイゼーションに使用した場合、抗 DIG-アルカリホスファターゼ複合体による化学発光およびドットブロットまたはサザンブロット上の CSPD により、0.03 pg の相同 DNA が検出されます。

原理

DIG ラベルDNA プローブは、ランダムプライムのラベリング技術に基づいて DIG-High Prime で生成されます。DIG-High Prime は、Digoxigenin-11-dUTP およびランダムプライムラベリングに必要なすべての試薬を含む特別に開発された反応混合物であり、最適化された 5 倍濃縮反応バッファーの 50%グリセロール溶液に事前混合した Klenow 酵素が含まれています。

調製ノート

反応混合液またはハイブリダイゼーションバッファー中の DIG ラベルプローブは、-15～-25°Cで保存することで 12 ヵ月間以上安定します。使用前に新たに変性した場合、それらは数回再使用することができます。

アッセイ時間：80 分間

サンプル材料

100 bp 以上の DNA 断片
線状プラスミド、コスミドまたはλDNA
スーパーコイル状 DNA
または軽微な量の DNA（10 ng）、例えば、ゲルからまたは溶融アガロースにおいて単離された DNA 制限酵素断片

注：最適な結果を得るためには、テンプレート DNA は線状とし、サイズを 100 bp 以上にする必要があります。テンプレート DNA > 5 kb は、ラベリングする前に 4 bp カッターを用いて制限酵素消化する必要があります。

その他情報

ライフサイエンス研究専用。診断目的での使用はできません。

安全性情報

• 保管分類コード: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• 引火点(°F): No data available
• 引火点(℃): No data available