T4049

Soluzione Tripsina-EDTA

0.25%, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 2.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• Sinonimo/i: Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numero MDL: MFCD00130286
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Proprietà

• Origine biologica: Porcine
• Livello qualitativo: 400
• Sterilità: sterile-filtered
• Nome Commerciale: BioReagent
• Forma fisica: solution
• PM: 23.4 kDa
• Concentrazione: 0.25%
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Impurezze: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH: 7.0-7.6
• Condizioni di spedizione: dry ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Descrizione generale

La tripsina è costituita da un polipeptide a catena singola che consta di 223 residui amminoacidici ed è il prodotto della rimozione dell'esapeptide N-terminale del tripsinogeno, che viene tagliato a livello del legame peptidico Lys - Ile. La sequenza di aminoacidi forma legami crociati mediante 6 ponti disolfuro. Questa struttura costituisce la forma nativa della tripsina, chiamata beta-tripsina. La BETA-tripsina è convertita per autolisi in alfa -tripsina, mediante scissione a livello del residui Lys - Ser. La tripsina fa parte della famiglia delle serin proteasi.

Applicazioni

La soluzione di tripsina-EDTA è stata usata:

• per staccare le cellule di carcinoma colorettale umano HT29 coltivate in terreno RPMI 1640 supplementato con siero fetale di vitello al 10% per la determinazione della frequenza cellulare relativa in campioni altamente concentrati;
• per tripsinizzare la linea cellulare di rene embrionale umano tcA-201 transfettata in modo transiente;
• per il rilascio per via enzimatica di fibroblasti murini (linea cellulare L929) adesi a impalcature (scaffold), nel corso di esperimenti di coltura cellulare intesi a verificare l′esito di una serie di trattamenti modificati applicati ad impalcature e fibre non-tessute di acido poli(L/D)lattico 96/4.

Idonea alla preparazione di sospensioni di cellule singole da sottoporre a sequenziamento.

Questo prodotto viene comunemente utilizzato per staccare le cellule aderenti dalla superficie di coltura. La concentrazione di tripsina necessaria per staccare le cellule dal loro substrato dipende principalmente dal tipo di cellula e dal tempo passato in coltura.

Azioni biochim/fisiol

La tripsina taglia i peptidi a livello del C-terminale dei residui di lisina e arginina. Il tasso di idrolisi di questa reazione viene rallentato se in una delle due parti del sito di taglio è presente un residuo acido, inoltre si ha la completa inibizione dell′idrolisi se a livello del lato carbossilico del sito di taglio è presente un residuo di prolina. Il pH ottimale per l′attività della tripsina è fra 7 e 9. La tripsina è inoltre in grado di tagliare i legami ammidici e i legami estere dei derivati sintetici degli amminoacidi. L'EDTA viene aggiunto alle soluzioni di tripsina come agente chelante allo scopo di neutralizzare gli ioni calcio e magnesio che possono mascherare i legami peptidici su cui agisce la tripsina. La rimozione di tali ioni aumenta l'attività enzimatica.

Gli inibitori della serina proteasi quali ad esempio DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e aprotinina, sono in grado di inibire l′attività della tripsina

Componenti

Soluzione di tripsina (2,5 g/l tripsina porcina e 0,2 g/l EDTA•4Na in soluzione salina bilanciata di Hank con rosso fenolo, 1X, testata per colture cellulari)

Avvertenza

Questo prodotto è conservato congelato tra -10 e -40 °C. Si consiglia di evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento.

Nota sulla preparazione

Questo prodotto contiene rosso fenolo. A causa della spedizione in ghiaccio secco, potrebbe esserci un significativo accumulo di anidride carbonica all′interno della confezione. E′ possibile che la CO₂ entri nella soluzione e ne abbassi leggermente il pH, conferendo un colore arancione piuttosto che rosato. La soluzione di colore arancione, è comunque adatta all'uso, il pH può comunque essere regolato mediante l′aggiunta di idrossido di sodio. L'incubazione con una concentrazione di tripsina troppo elevata per un lungo periodo può danneggiare le membrane cellulari e provocare la morte delle cellule. La solubilizzazione della tripsina o la diluizione di una soluzione concentrata devono essere eseguite con una soluzione salina tamponata priva di Ca²⁺ e Mg²⁺.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable