T3924

Soluzione Tripsina-EDTA

1 ×, sterile; sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 0.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• Sinonimo/i: Cell dissociation enzyme
• Classificazione EC (Enzyme Commission): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numero MDL: MFCD00130286
• Codice UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.78

Proprietà

• Origine biologica: Porcine
• Livello qualitativo: 400
• Sterilità: sterile; sterile-filtered
• Nome Commerciale: BioReagent
• Forma fisica: solution
• PM: 23.4 kDa
• Concentrazione: 1 ×
• tecniche: cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Impurezze: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH: 7.0-9.0
• Condizioni di spedizione: dry ice
• Temperatura di conservazione: −20°C

Descrizione

Applicazioni

Questo prodotto viene comunemente utilizzato per il distacco delle cellule aderenti dalla superficie di coltura. La concentrazione di tripsina necessaria per rimuovere le cellule dal loro substrato dipende principalmente dal tipo di cellula e dall′età della coltura.

Idoneo all′impiego nella preparazione di sospensioni di singole cellule per il sequenziamento.

Azioni biochim/fisiol

La tripsina taglia i peptidi a livello del C-terminale dei residui di lisina e arginina. La velocità di idrolisi di questa reazione viene rallentata se su uno dei lati del sito di scissione è presente un residuo acido. L′idrolisi si arresta se sul lato carbossile del sito di scissione è presente un residuo di prolina. Il pH ottimale per l′attività della tripsina è fra 7 e 9. La tripsina è inoltre in grado di scindere i legami ammidici e i legami estere dei derivati sintetici degli amminoacidi. L'EDTA viene aggiunto alle soluzioni di tripsina come agente chelante allo scopo di neutralizzare gli ioni calcio e magnesio che mascherano i legami peptidici su cui agisce la tripsina. La rimozione di tali ioni aumenta l'attività enzimatica.

Gli inibitori delle serin proteasi quali ad esempio DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e aprotinina, sono in grado di inibire l′attività della tripsina

Componenti

La tripsina è costituita da un polipeptide a catena singola di 223 residui di amminoacidi, prodotto dalla rimozione dell'esapeptide N-terminale dal tripsinogeno che viene scisso a livello del legame peptidico Lys.-Ile. La sequenza di aminoacidi forma legami crociati mediante 6 ponti disolfuro. Questa struttura costituisce la forma nativa della tripsina, chiamata beta-tripsina. La BETA-tripsina è convertita per autolisi in alfa -tripsina, mediante scissione a livello del residui Lys - Ser. La tripsina fa parte della famiglia delle serin proteasi .

Avvertenza

Questo prodotto va conservato congelato tra -10 e -40 °C. Si consiglia di evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento.

Nota sulla preparazione

Questo prodotto contiene rosso fenolo. A causa della spedizione in ghiaccio secco, potrebbe esserci un significativo accumulo di anidride carbonica all′interno della confezione. E′ possibile che la CO₂ entri nella soluzione e ne abbassi leggermente il pH, conferendo un colore arancione invece che rosato. La soluzione di colore arancione, è comunque adatta all'uso, il pH può comunque essere regolato mediante l′aggiunta di idrossido di sodio. L'incubazione con una concentrazione di tripsina troppo elevata per un lungo periodo può danneggiare le membrane cellulari e provocare la morte delle cellule. La solubilizzazione della tripsina o la diluizione da una soluzione concentrata devono essere eseguite con una soluzione salina tamponata priva di Ca²⁺ e Mg²⁺.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable