RTN70

Kit di minipreparazione dell′RNA totale di mammifero GenElute^™

sufficient for 70 purifications

• Sinonimo/i: Kit pe RNA di mammifero GenElute^™, Gen Elute
• Codice UNSPSC: 41105501
• NACRES: NA.52

Proprietà

• impiego: sufficient for 70 purifications
• Livello qualitativo: 200
• Caratteristiche più verdi: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• tecniche: RNA purification: suitable
• Categoria alternativa più verde: Aligned,
• Temperatura di conservazione: 15-25°C

Descrizione

Descrizione generale

Il kit di minipreparazione dell′RNA totale di mammifero GenElute di Sigma fornisce un modo semplice e comodo per isolare l′RNA totale da tessuti e cellule di mammifero. Si forniscono protocolli per cellule, tessuti e tessuti fibrosi. I protocolli differiscono nelle condizioni per la lisi e la disgregazione cellulare. Dopo avere legato l′RNA alla colonna legante GenElute, la procedura di purificazione è la stessa per tutti i materiali di partenza. Per i tessuti fibrosi, con il kit è necessario usare la proteinasi K (n. di cat. P4850) per garantire l′effettiva disgregazione cellulare. Il kit riunisce i vantaggi di un sistema a base di silice e del formato microspin ed elimina la necessità di gradienti di cloruro di cesio, precipitazione in alcol e composti organici pericolosi come fenolo e cloroformio. Cellule o tessuti sono lisati e omogeneizzati in un tampone che contiene tiocianato di guanidina per garantire la completa
denaturazione delle macromolecole e l′inattivazione delle RNasi. L′aggiunta di etanolo induce il legame dell′RNA quando si fa ruotare il lisato attraverso una membrana di silice in una provetta per microcentrifuga. Dopo il lavaggio per rimuovere i contaminanti, si eluisce l′RNA in 50-100 μL di soluzione di eluizione. In meno di 30 minuti è possibile isolare fino a 150 μg di RNA totale.

Se si devono eliminare tutte le tracce di DNA, si raccomanda un ulteriore trattamento con DNasi I. La digestione con DNasi I può essere eseguita mentre l′RNA è legato alla colonna legante GenElute con il set per digestione su colonna con DNase I (DNASE10 e DNASE70). In alternativa, per una rimozione più rigorosa del DNA contaminante, si può trattare la preparazione finale di RNA con DNasi I per amplificazione (AMPD1).

Il nostro impegno è fornire prodotti alternativi verdi che aderiscano ad almeno uno dei 12 principi della chimica verde. Rispetto all′uso standard di fenolo e cloroformio per eseguire le estrazioni di DNA, questo prodotto è intrinsecamente più sicuro dal punto di vista chimico.

Applicazioni

Il kit di minipreparazione dell′RNA totale di mammifero GenElute^™ è stato usato per isolare l′RNA totale:

• dall′area pre-ottica del cervello di ratto congelato istantaneamente
• dalla parte centrale del tessuto del mantello che contiene le gonadi del mitilo Mytilus trossulus
• dal fegato murino.

L′RNA purificato è pronto per la trascrizione inversa e la PCR, la marcatura e l′analisi microarray, e altre applicazioni comuni. Tenere presente che nelle condizioni usate con questo kit il recupero di RNA di lunghezza inferiore ai 200 nucleotidi, come tRNA, 5S rRNA e 5.8S rRNA, non avviene in modo efficiente.

Caratteristiche e vantaggi

• Purifica l′RNA totale da una quantità massima di 10⁷ cellule o 40 mg di tessuto per preparazione
• Resa massima di 150 μg di RNA totale, puro, concentrato per preparazione
• Recupera l′RNA anche da sole 100 cellule
• Da 12 a 18 preparazioni semplici ed efficienti in 30 minuti
• Metodi a scambio anionico più rapidi del flusso per gravità
• Nessun passaggio scomodo associato a resine e sospensioni magnetiche
• 40% di purificazioni in più per kit rispetto al fornitore leader del mercato

Altre note

Il kit di purificazione dell′RNA totale di mammifero GenElute^™ combina la tecnologia della membrana di silice con un comodo formato della colonna di spin per un rapido metodo di legame, lavaggio ed eluizione per la preparazione di RNA totale di alta qualità.

Per ulteriori informazioni, visitare www.sigma-aldrich.com/extract-n-amp.

Principio

I campioni sono lisati e omogeneizzati in tiocianato di guanidina e 2-mercaptoetanolo per rilasciare l′RNA e inattivare le RNasi. I lisati sono centrifugati attraverso una colonna di filtrazione per rimuovere i detriti cellulari e tagliare il DNA. Quindi si applica il filtrato a una colonna di silice a elevata capacità per legare l′RNA totale e in seguito si procede a lavaggio ed eluizione. È possibile recuperare fino a 150 μg di RNA totale per preparazione in 100 μL d′acqua. L′RNA purificato è pronto per i northern blot (Fig. 1), la RT-PCR (Fig. 2) e altre applicazioni comuni.

Note legali

GenElute is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Informazioni sulla sicurezza

• Pittogrammi: GHS06,GHS08,GHS05,GHS09
• Avvertenze: Danger
• Indicazioni di pericolo: H301 + H331,H310,H314,H317,H361f,H373,H410
• Consigli di prudenza: P202 - P273 - P280 - P303 + P361 + P353 - P304 + P340 + P310 - P305 + P351 + P338
• Classi di pericolo: Acute Tox. 2 Dermal - Acute Tox. 3 Inhalation - Acute Tox. 3 Oral - Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1 - Repr. 2 - Skin Corr. 1C - Skin Sens. 1 - STOT RE 2 Oral
• Organi bersaglio: Liver,Heart
• Rischi supp: EUH032
• Codice della classe di stoccaggio: 6.1A - Combustible acute toxic Cat. 1 and 2 / very toxic hazardous materials