11277073910
Roche
Mix di marcatura dell′RNA con DIG
sufficient for 20 reactions, solution
Sinonimo/i:
Marcatura di acidi nucleici
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About This Item
Codice UNSPSC:
41105500
Prodotti consigliati
Forma fisica
solution
Livello qualitativo
impiego
sufficient for 20 reactions
Confezionamento
pkg of 40 μL
Produttore/marchio commerciale
Roche
Impurezze
Ribonuclease, none detected (up to 20 µl using MSII-RNA)
Colore
colorless
Solubilità
water: miscible
Temperatura di conservazione
−20°C
Descrizione generale
Efficienza di marcatura: Da 1μg di DNA stampo lineare vengono trascritti circa 10μg di RNA marcato con digossigenina a tutta lunghezza.
Tempo del saggio: 135 minuti
Materiale del campione
DNA plasmidico linearizzato:
il DNA da trascrivere viene clonato nel sito polylinker di un vettore di trascrizione appropriato che contiene, adiacente al polylinker, un promotore per le RNA polimerasi SP6, T7 o T3. Per la sintesi di trascritti "run off” il plasmide viene linearizzato mediante un enzima di restrizione. Vanno utilizzati enzimi di restrizione che generano estremità 5′-overhang, mentre vanno evitate le 3′ overhangs. Il DNA stampo linearizzato deve essere purificato mediante estrazione con fenolo cloroformio e precipitazione in etanolo, per evitare contaminazioni da RNasi. Per la trascrizione ′run around′ viene utilizzato DNA plasmidico circolare.
Prodotti da PCR:
come stampi per la trascrizione possono essere usati anche frammenti di PCR contenenti le sequenze del promotore della RNA polimerasi. Prima della trascrizione si consiglia di purificare il frammento da PCR mediante colonna HighPure.
Tempo del saggio: 135 minuti
Materiale del campione
DNA plasmidico linearizzato:
il DNA da trascrivere viene clonato nel sito polylinker di un vettore di trascrizione appropriato che contiene, adiacente al polylinker, un promotore per le RNA polimerasi SP6, T7 o T3. Per la sintesi di trascritti "run off” il plasmide viene linearizzato mediante un enzima di restrizione. Vanno utilizzati enzimi di restrizione che generano estremità 5′-overhang, mentre vanno evitate le 3′ overhangs. Il DNA stampo linearizzato deve essere purificato mediante estrazione con fenolo cloroformio e precipitazione in etanolo, per evitare contaminazioni da RNasi. Per la trascrizione ′run around′ viene utilizzato DNA plasmidico circolare.
Prodotti da PCR:
come stampi per la trascrizione possono essere usati anche frammenti di PCR contenenti le sequenze del promotore della RNA polimerasi. Prima della trascrizione si consiglia di purificare il frammento da PCR mediante colonna HighPure.
Le sonde di RNA a singolo filamento a lunghezza definita marcate con DIG sono generate mediante trascrizione in vitro. Il DIG-11-UTP viene incorporato nel trascritto ogni 20-25 nucleotidi mediante le RNA polimerasi SP6, T7 e T3, in condizioni standard. La DIG RNA Labelling Mix è progettata specificamente per l'uso con le RNA polimerasi SP6, T7 e T3, fornite con un buffer di trascrizione ottimizzato.
Comoda miscela di nucleotidi per la marcatura dell'RNA con Digoxigenin-11-UTP.
Contenuto
Soluzione 10x contenente: ATP, CTP, GTP 10 mM (ciascuno), UTP 6,5 mM, DIG-11-UTP 3,5 mM.
Comoda miscela di nucleotidi per la marcatura dell'RNA con Digoxigenin-11-UTP.
Contenuto
Soluzione 10x contenente: ATP, CTP, GTP 10 mM (ciascuno), UTP 6,5 mM, DIG-11-UTP 3,5 mM.
Specificità
Inattivazione termica: fermare la reazione aggiungendo 2 μL di EDTA 0,2 M (pH 8,0).
Applicazioni
Marcatura dell'RNA con digossigenina-11-UTP mediante trascrizione in vitro con RNA polimerasi SP6, T7 e T3. L'RNA marcato con DIG viene utilizzato in varie tecniche di ibridazione:
- northern blots
- southern blots
- dot blots
- Plaque lift o colony lift
- Saggi di protezione da RNasi
- Ibridazione in situ su cromosomi, cellule e sezioni di tessuti
Caratteristiche e vantaggi
La DIG RNA Labelling Mix è appositamente progettata per l'uso con le RNA polimerasi SP6, T7 e T3 di Roche, fornite con un buffer di trascrizione ottimizzato.
Qualità
Testata nel kit per la marcatura dell′RNA con DIG e nel kit per il rilevamento degli acidi nucleici con DIG.
Altre note
Esclusivamente per ricerche di life science. Non usare a scopo diagnostico.
Avvertenze
Warning
Indicazioni di pericolo
Consigli di prudenza
Classi di pericolo
Acute Tox. 4 Oral
Codice della classe di stoccaggio
12 - Non Combustible Liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 1
Punto d’infiammabilità (°F)
does not flash
Punto d’infiammabilità (°C)
does not flash
Certificati d'analisi (COA)
Cerca il Certificati d'analisi (COA) digitando il numero di lotto/batch corrispondente. I numeri di lotto o di batch sono stampati sull'etichetta dei prodotti dopo la parola ‘Lotto’ o ‘Batch’.
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