CBA410
Saggio di proliferazione cellulare con EZMTT, basato su MTT, 220X
A novel tetrazolium salt based proliferation assay for continous monitoring of growth in mammalian and bacterial cell culture.
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About This Item
Codice UNSPSC:
12352207
Prodotti consigliati
Metodo di rivelazione
colorimetric
Descrizione generale
NAD+/NADH e NADP+/NADPH sono cofattori biologici importanti per quegli enzimi ossidoriduttasi fondamentali per svariati processi biologici, come il metabolismo energetico, la funzione mitocondriale, le funzioni immunologiche e la morte cellulare. Per questo motivo, gli enzimi ossidoriduttasi si usano come indicatori dell′attività metabolica delle cellule.
EZMTT è un nuovo sale tetrazolico monosolfonato, sale sodico di 2-(3-(2-metossi-4-nitrofenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-tetrazol-3-io-5-ile)-benzensolfonato (EZMTT). I reagenti a base di EZMTT consentono una rivelazione di alta qualità e riproducibile degli enzimi ossidoriduttasi, indicatori dell′attività metabolica della cellula. In seguito alla reazione con gli enzimi metabolici, l′EZMTT viene convertito in un formazano giallognolo che non richiede una fase di solubilizzazione e può essere misurato con assorbanza a 450 nm. Il saggio con EZMTT permette di verificare in modo continuo la proliferazione cellulare e misurare la citotossicità (perdita di cellule vitali) o l′attività citostatica (conversione da una stato proliferativo a uno di quiescenza) di possibili medicinali o agenti tossici.
I tradizionali sali di tetrazolio, come l′MTT, reagiscono con gli enzimi ossidoriduttasi cellulari NAD(P)H-dipendenti producendo un formazano insolubile, che richiede solubilizzazione, ha minore sensibilità ed è un saggio al punto finale.
<bold>Caratteristiche e vantaggi dell'EZMTT:</bold>
• premiscelabile con qualsiasi terreno e quindi aggiunto alle cellule;
• molto stabile e scarsamente citotossico. La durata dell′incubazione dipende dal numero di cellule saggiate; nel caso in cui la differenza di colore tra colture con/senza cellule non sia chiara, è possibile un′incubazione più lunga, da ore a settimane;
• la riduzione dell′EZMTT produce e un colorante giallo idrosolubile a base di formazano, che non richiede solubilizzazione
• maggiore sensibilità rispetto ai tradizionali saggi con MTT e permette di verificare facilmente la proliferazione delle cellule (sia di mammifero che batteriche) mediante assorbanza a 450 nm o variazione di colore. A tempi di incubazione più lunghi, è possibile rilevare anche una sola cellula batterica;
• molto meno reattivo con altri antiossidanti come il beta-mercaptoetanolo (BME)
Protocollo di analisi
1. Staccare le cellule HeLa e seminarle a densità differente (0, 2.500, 5.000, 10.000, 20.000, 30.000, 40.000, 50.000) in triplicato nei pozzetti di una piastra a 96 pozzetti contenenti DMEM con FBS al 10% (100 μL).
2. Incubare a 37°C, 5% CO2 per 3-4 ore o per tutta la notte.
3. Scongelare la soluzione di EZMTT 200 X per il saggio di proliferazione cellulare e miscelarla con il terreno di coltura (diluire 20 volte).
4. Aggiungere 10 μL della soluzione di EZMTT 10X a tutti i pozzetti della piastra (diluizione finale di 200 volte).
5. Incubare la piastra nell′incubatore per 1-4 ore, quindi misurare l′assorbanza a 450 nm con un lettore per micropiastre.
EZMTT è un nuovo sale tetrazolico monosolfonato, sale sodico di 2-(3-(2-metossi-4-nitrofenil)-2-(4-nitrofenil)-2H-tetrazol-3-io-5-ile)-benzensolfonato (EZMTT). I reagenti a base di EZMTT consentono una rivelazione di alta qualità e riproducibile degli enzimi ossidoriduttasi, indicatori dell′attività metabolica della cellula. In seguito alla reazione con gli enzimi metabolici, l′EZMTT viene convertito in un formazano giallognolo che non richiede una fase di solubilizzazione e può essere misurato con assorbanza a 450 nm. Il saggio con EZMTT permette di verificare in modo continuo la proliferazione cellulare e misurare la citotossicità (perdita di cellule vitali) o l′attività citostatica (conversione da una stato proliferativo a uno di quiescenza) di possibili medicinali o agenti tossici.
I tradizionali sali di tetrazolio, come l′MTT, reagiscono con gli enzimi ossidoriduttasi cellulari NAD(P)H-dipendenti producendo un formazano insolubile, che richiede solubilizzazione, ha minore sensibilità ed è un saggio al punto finale.
<bold>Caratteristiche e vantaggi dell'EZMTT:</bold>
• premiscelabile con qualsiasi terreno e quindi aggiunto alle cellule;
• molto stabile e scarsamente citotossico. La durata dell′incubazione dipende dal numero di cellule saggiate; nel caso in cui la differenza di colore tra colture con/senza cellule non sia chiara, è possibile un′incubazione più lunga, da ore a settimane;
• la riduzione dell′EZMTT produce e un colorante giallo idrosolubile a base di formazano, che non richiede solubilizzazione
• maggiore sensibilità rispetto ai tradizionali saggi con MTT e permette di verificare facilmente la proliferazione delle cellule (sia di mammifero che batteriche) mediante assorbanza a 450 nm o variazione di colore. A tempi di incubazione più lunghi, è possibile rilevare anche una sola cellula batterica;
• molto meno reattivo con altri antiossidanti come il beta-mercaptoetanolo (BME)
Protocollo di analisi
1. Staccare le cellule HeLa e seminarle a densità differente (0, 2.500, 5.000, 10.000, 20.000, 30.000, 40.000, 50.000) in triplicato nei pozzetti di una piastra a 96 pozzetti contenenti DMEM con FBS al 10% (100 μL).
2. Incubare a 37°C, 5% CO2 per 3-4 ore o per tutta la notte.
3. Scongelare la soluzione di EZMTT 200 X per il saggio di proliferazione cellulare e miscelarla con il terreno di coltura (diluire 20 volte).
4. Aggiungere 10 μL della soluzione di EZMTT 10X a tutti i pozzetti della piastra (diluizione finale di 200 volte).
5. Incubare la piastra nell′incubatore per 1-4 ore, quindi misurare l′assorbanza a 450 nm con un lettore per micropiastre.
Stoccaggio e stabilità
Conservare la piastra del saggio di proliferazione cellulare con EZMTT a -20°C, al riparo dalla luce.
Esclusione di responsabilità
Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.
Codice della classe di stoccaggio
10 - Combustible liquids
Classe di pericolosità dell'acqua (WGK)
WGK 2
Punto d’infiammabilità (°F)
188.6 °F
Punto d’infiammabilità (°C)
87 °C
Certificati d'analisi (COA)
Cerca il Certificati d'analisi (COA) digitando il numero di lotto/batch corrispondente. I numeri di lotto o di batch sono stampati sull'etichetta dei prodotti dopo la parola ‘Lotto’ o ‘Batch’.
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