17-441
Kit per saggio dello stato di attivazione di Rac1/Cdc42
The Rac1/Cdc42 Activation Assay provides an effective method for detecting Rac & Cdc42 activity in cell lysates.
Sinonimo/i:
Rac1 activation assay
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About This Item
Codice UNSPSC:
12161503
eCl@ss:
32161000
NACRES:
NA.84
Prodotti consigliati
Livello qualitativo
Reattività contro le specie
human, mouse, rat
Produttore/marchio commerciale
Upstate®
tecniche
activity assay: suitable
affinity binding assay: suitable (G-protein)
N° accesso NCBI
N° accesso UniProt
Condizioni di spedizione
wet ice
Informazioni sul gene
human ... RAC1(5879)
Descrizione generale
Il saggio dello stato di attivazione di Rac/cdc42 (N° Cat. 17-441) costituisce un metodo efficace per individuare l′attività delle proteine Rac e Cdc42 in lisati cellulari. Il metodo ricorre all′effettore a valle di Rac/Cdc42, la proteina-chinasi p21-attivata (PAK1), per isolare dal campione la forma attiva di Rac/Cdc42 legata a GTP. Il dominio che lega p21 (PBD) della PAK1 è espresso come proteina di fusione con tag GST e legato a sferette di agarosio. Dopo la precipitazione si esegue l′immunoblotting e si rileva la forma attivata di Rac/Cdc42 con specifici anticorpi monoclonali seguiti da anticorpi secondari coniugati con HRP e il reagente ECL.
Specificità
Reattività crociata tra specie: uomo e topo Si prevede reattività crociata con tutti i mammiferi.
Anti-Rac1, clone 23A8: Reattività crociata tra specie: uomo, topo, ratto. Non è nota reattività crociata con altre specie.
Anti-cdc42 Reattività crociata tra specie: uomo, topo, ratto e cane. Non è nota reattività crociata con altre specie.
Anti-Rac1, clone 23A8: Reattività crociata tra specie: uomo, topo, ratto. Non è nota reattività crociata con altre specie.
Anti-cdc42 Reattività crociata tra specie: uomo, topo, ratto e cane. Non è nota reattività crociata con altre specie.
Componenti
Reagente per saggio dello stato di attivazione di Rac/cdc42 (PDP di PAK-1 legato ad agarosio), # Catalogo 14-325: una microprovetta contenente 300 μg del PBD di PAK-1 legato a 150 μL di sferette di agarosio-glutatione, sotto forma di slurry al 50% in PBS 20mM, pH 7,4, contenente glicerolo al 50% per un volume finale di 300 μL.
Anti-Rac1, clone 23A8, # Catalogo 05-389: una microprovetta contenente 250 μg IgG2b di topo purificate con proteina G in 250 μL di tampone di conservazione (Tris-glicina 0,1 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, contenente azoturo di sodio allo 0,05%).
Anti-cdc42, (IgG1 monoclonali di topo), # Catalogo 05-542: una microprovetta contenente 50 μg di IgG1 di topo purificate in 200 μL di tampone di conservazione (fosfato di sodio 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, azoturo di sodio 1,5 mM contenente BSA 1 mg/mL) al 50% e glicerolo al 50%.
Tampone di lisi/lavaggio agli ioni di Mg2+ (mLB), 5X, # Catalogo 20-168: due flaconcini contenente ciascuno 18 mL di MLB 5X: HEPES 125 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Igepal CA-630 5%, MgCl2 50 mM, EDTA 5 mM e glicerolo al 10%.
GTPγS 100X, 10mM, # Catalogo 20-176: una microprovetta contenente 50 μL di GTPγS 10 mM, soluzione concentrata 100X, in Tris-HCl 50 mM, pH 7,8, analogo non idrolizzabile della GTP. Sufficiente per marcare 5 mL di lisato cellulare.
GDP 100X, 100mM, # Catalogo 20-177: una microprovetta contenente 50 μL di GDP 100 mM, soluzione concentrata 100X, in Tris-HCl, 50 mM pH 7,8. La GDP (guanosina 5′-difosfato) è impiegata per marcare in vitro le proteine G in forma inattiva. Sufficiente per la marcatura di 5ml di lisati cellulari.
Anti-Rac1, clone 23A8, # Catalogo 05-389: una microprovetta contenente 250 μg IgG2b di topo purificate con proteina G in 250 μL di tampone di conservazione (Tris-glicina 0,1 M, pH 7,4, NaCl 0,15 M, contenente azoturo di sodio allo 0,05%).
Anti-cdc42, (IgG1 monoclonali di topo), # Catalogo 05-542: una microprovetta contenente 50 μg di IgG1 di topo purificate in 200 μL di tampone di conservazione (fosfato di sodio 20 mM, pH 7,5, NaCl 150 mM, azoturo di sodio 1,5 mM contenente BSA 1 mg/mL) al 50% e glicerolo al 50%.
Tampone di lisi/lavaggio agli ioni di Mg2+ (mLB), 5X, # Catalogo 20-168: due flaconcini contenente ciascuno 18 mL di MLB 5X: HEPES 125 mM, pH 7,5, NaCl 750 mM, Igepal CA-630 5%, MgCl2 50 mM, EDTA 5 mM e glicerolo al 10%.
GTPγS 100X, 10mM, # Catalogo 20-176: una microprovetta contenente 50 μL di GTPγS 10 mM, soluzione concentrata 100X, in Tris-HCl 50 mM, pH 7,8, analogo non idrolizzabile della GTP. Sufficiente per marcare 5 mL di lisato cellulare.
GDP 100X, 100mM, # Catalogo 20-177: una microprovetta contenente 50 μL di GDP 100 mM, soluzione concentrata 100X, in Tris-HCl, 50 mM pH 7,8. La GDP (guanosina 5′-difosfato) è impiegata per marcare in vitro le proteine G in forma inattiva. Sufficiente per la marcatura di 5ml di lisati cellulari.
Qualità
Determinata di routine precipitando Rac1-GTP e cdc42-GTP da lisati di cellule 3T3/A31 ed HeLa caricati con GTPγS (i lisati vengono caricati in vitro con GTPγS per cdc42-GTP). I complessi precipitati, Rac1-GTP e cdc42-GTP, vengono rilevati mediante immunoblotting con anticorpi anti-Rac1 (1 μg/ml).
Stoccaggio e stabilità
1 anno dalla data di spedizione a -20 °C
Note legali
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Esclusione di responsabilità
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Avvertenze
Danger
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Consigli di prudenza
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Aquatic Acute 1 - Aquatic Chronic 2 - Eye Dam. 1
Codice della classe di stoccaggio
10 - Combustible liquids
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