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用途
sufficient for 96 tests
品質等級
包裝
pkg of 1 96-well plate(s)
製造商／商標名
Calbiochem®
儲存條件
OK to freeze
avoid repeated freeze/thaw cycles
protect from light
assay range
sensitivity: 0.63 ng/mL
standard curve range: 0.09-100 ng/mL
輸入
sample type tissue
sample type cells
檢測方法
fluorometric
運輸包裝
wet ice
一般說明
一种用于测定组织蛋白酶B活性的灵敏荧光检测（最大激发波长：~360-380 nm；最大发射波长：~430-460 nm）。组织蛋白酶B是一种半胱氨酸蛋白酶，与侵袭性增加和恶性细胞表型的发展有关。组织蛋白酶B也与炎症性气道疾病有关。
特異性
<div class="Bio_doc_image">表3：与其他组织蛋白酶的交叉反应性
</div>
</div>
成分
组织蛋白酶B酶、校准标准品、组织蛋白酶B底物、测定缓冲液、组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、细胞裂解缓冲液、微量滴定板、封板机和用户方案。
警告
毒性：多个毒性值，请参阅MSDS（O）
規格
试验时间：30 min
原則
Calbiochem 组织蛋白酶B活性测定试剂盒（荧光）旨在测量组织提取物和细胞裂解物中的组织蛋白酶B活性，并用于筛选组织蛋白酶B抑制剂。
注：最初使用后，应将对照组织蛋白酶B分装成等分试样并储存于-20°C。避免冻融循环
注：最初使用后，应将对照组织蛋白酶B分装成等分试样并储存于-20°C。避免冻融循环
準備報告
• 稀释缓冲液：用dH2O按1:10稀释测定缓冲液示例：将0.5 ml测定缓冲液添加至4.5 ml蒸馏水中。 • 标准品：不含AMC的标准品以2 mM的储备溶液（100X浓缩溶液）的形式提供。为制备校准曲线，制备浓度范围为20 µM至1.25 µM的标准品系列稀释液。示例：标记6个eppendorf管。用移液器吸取495 µl稀释缓冲液到第一个试管中，然后将250 µl移入其余试管中。在第一个试管中加入5 µl的2 mM AMC标准品。涡旋并从该试管转移250 µl至下一个试管。通过将250 µl转移到5号试管进行连续稀释。标记为#6的试管仅包含稀释缓冲液（空白）。•底物工作液：底物应用蒸馏水稀释100倍。示例：为制备2 ml底物溶液，将20 µl底物贮备液添加至1.98 ml蒸馏水中。 • 活化缓冲液：半胱氨酸以250倍浓缩试剂的形式提供。为了制备活化缓冲液，应将8 µl 1 M半胱氨酸加入2 ml所提供的检测缓冲液中（这足以容纳一半平板）。 • 抑制剂：CA-074抑制剂以10倍储备液的形式提供，应使用活化缓冲液稀释。示例：用90 µl活化缓冲液稀释10 µl储备液，得到100 µl工作溶液。•对照：按照小瓶标签上的指示，用稀释缓冲液稀释对照人组织蛋白酶B。组织蛋白酶B酶应分装成等份，保存于-70°C以保持活性。
如有必要，用检测缓冲液稀释样品。注意：如果测得的FU超过9,000，则应进一步稀释样品。 • 细胞裂解液：用冰冷的PBS洗涤细胞沉淀。添加500-1000 µl细胞裂解缓冲液（每1x107个细胞约1 ml），并在冰上孵育30分钟。在预冷的台式微量离心机中以14,000 x g涡旋并离心裂解物。立即将上清转移至新的微量离心管中，弃去沉淀。在通过BCA蛋白测定法测定蛋白浓度之前，将裂解物按1:5或1:10稀释。
儲存和穩定性
按照标签上的指示，将未开封的组件储存在-20°C和-70°C下。所有试剂盒组分一旦打开，可在以下条件下储存：
室温下的测定缓冲液、细胞裂解缓冲液、96孔板和封板机
-20°C下的组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、组织蛋白酶B底物和校准标准品
-70°C下的组织蛋白酶B对照品（等分试样）
室温下的测定缓冲液、细胞裂解缓冲液、96孔板和封板机
-20°C下的组织蛋白酶B抑制剂、还原试剂、组织蛋白酶B底物和校准标准品
-70°C下的组织蛋白酶B对照品（等分试样）
分析報告
获得的数据可以通过两种方式显示：1.以荧光单位表示：通过减去空白值校正所有样品的荧光值，然后计算各样品的平均荧光值，一式两份。对于生物样品，还应减去用抑制剂测定的样品值。或2.以游离AMC/mg总蛋白µmole数/时间（分钟）表示：如上所述计算平均荧光值。绘制AMC标准品的平均荧光值（y轴）与其浓度（以µmole计）（x轴）相关的曲线图。未知样品的组织蛋白酶B活性可以从标准曲线内插。计算每毫克总蛋白和时间单位中游离AMC的量（µmol）。
阳性对照
组织蛋白酶B
组织蛋白酶B
其他說明
Bervar, A., et al. 2003.Biol. Chem. 384, 447.
Grigolo, B. et al. 2003.Biomaterials 24, 1751.
Scolaris, A., et al. 2002.Biol. Chem. 383, 1297.
Murata, M., et al. 1991.FEBS Lett.280, 307.
Berquin, I.M. and Sloane, B.F.1996.Adv.Exp.Med. Biol. 389, 281.
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Buttle, D.J., 1994.In: Immunopharmacology of Joints and Connective Tissue (Dingle, J.T. and Davies, M.E., eds) London: Academic Press.225.
Barrett, A.J. and Kirschke, H., 1981.Methods Enzymol.80, 535.
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法律資訊
CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
儲存類別代碼
10 - Combustible liquids
Sebastian Fischer et al.
PloS one, 9(4), e94921-e94921 (2014-04-20)
B10 is a glycosylated derivative of betulinic acid with promising activity against glioma cells. Lysosomal cell death pathways appear to be essential for its cytotoxicity. We investigated the influence of hypoxia, nutrient deprivation and current standard therapies on B10 cytotoxicity.
Winifred P S Wong et al.
Journal of lipid research, 54(3), 816-822 (2012-12-19)
We used a mouse C57BL/6J×CASA/Rk intercross to map a locus on chromosome 14 that displayed a gender-dependent effect on cholesterol absorption from the intestine. Studies in congenic animals revealed a complex locus with multiple operating genetic determinants resulting in alternating
Zoe A Klein et al.
Neuron, 95(2), 281-296 (2017-07-21)
Progranulin (GRN) and TMEM106B are associated with several common neurodegenerative disorders including frontotemporal lobar degeneration (FTLD). A TMEM106B variant modifies GRN-associated FTLD risk. However, their functional relationship in vivo and the mechanisms underlying the risk modification remain unclear. Here, using transcriptomic
Juliet A Emamaullee et al.
Diabetes, 57(6), 1556-1566 (2008-03-22)
Clinical islet transplantation can provide insulin independence in patients with type 1 diabetes, but chronic graft failure has been observed. This has been attributed in part to loss of >or=60% of the transplanted islets in the peritransplant period, resulting in
Yueyang Liu et al.
Autophagy, 15(3), 493-509 (2018-10-12)
Mounting attention has been focused on defects in macroautophagy/autophagy and the autophagy-lysosomal pathway (ALP) in cerebral ischemia. TFEB (transcription factor EB)-mediated induction of ALP has been recently considered as the common mechanism in ameliorating the pathological lesion of myocardial ischemia
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