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QIA120

Sigma-Aldrich

钙蛋白酶活性检测试剂盒,荧光

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About This Item

分類程式碼代碼:
41116133
NACRES:
NA.84

用途

sufficient for 96 tests

品質等級

包裝

pkg of 1 96-well plate(s)

製造商/商標名

Calbiochem®

儲存條件

OK to freeze
avoid repeated freeze/thaw cycles
protect from light

輸入

sample type serum
sample type plasma
sample type cell lysate

檢測方法

fluorometric

運輸包裝

wet ice

一般說明

钙蛋白酶是 Ca2+ 依赖性蛋白酶,其参与正常的细胞过程,包括细胞增殖、凋亡、分化和细胞迁移。需要能够在最大发射波长下测量荧光的荧光计或酶标仪:〜360 nm 和最大发射波长:~460 nm.

成分

校准标准品、阳性对照钙蛋白酶 1、底物、活化缓冲液、抑制缓冲液、还原剂、检测缓冲液、细胞裂解缓冲液、96 孔板、平板密封剂和说明书。

警告

毒性:多个毒性值,请参阅 MSDS(O)

規格

试验时间:1.5 h

準備報告

1.细胞裂解液:用冷的 PBS 洗涤细胞沉淀。b.加入 500-1000 µl 裂解缓冲液(每 1 x 107 细胞约 1 ml)并在冰上孵育 30 分钟。c.涡旋振荡并在预冷的台式微量离心机中以 14,000 x g 离心裂解液。d.立即将上清液转移至新的试管中并弃去沉淀物。e.在使用 BCA 蛋白质测定法测定蛋白质浓度之前,将裂解液至少以 1:10 稀释。2.如有必要,用检测缓冲液稀释样品。通常,蛋白质浓度 > 3 mg/ml 的细胞裂解液应稀释 5 倍。如果测得的 RFU 超过 6000,则应进一步稀释样品。
注意:该试剂盒提供了进行检测所需的所有试剂。使用前,将所有组件(对照钙蛋白酶 1 除外)加热至 15-25°C(室温);将对照钙蛋白酶 1 存放在冰上,直至使用。为了获得最佳结果,仅在需要时才制备试剂稀释液。 • 稀释标准:AMC 标准品以 1 mM 的储备溶液(100X 浓缩溶液)的形式提供。要制备校准曲线,请使用浓度范围为 0.625-10 µM 的标准品进行系列稀释液。示例:标记 6 个 eppendorf 管。用移液器吸取 495 µM 检测缓冲液到第一个试管中,然后将 200 µl 移入其余试管中。在第一个试管中加入 5 µl AMC 标准品。涡旋并从该试管转移 200 µl 至下一个试管。通过将 200 µl 转移到连续的试管中直至试管 5 继续进行连续稀释。标记为 6 的试管仅包含检测缓冲液(空白)。 • 稀释的底物:用检测缓冲液将底物稀释 100 倍。示例:制备足够进行 6 次连续稀的底物,使用 30 µl 底物 ,添加 2.97 ml 检测缓冲液进行稀释 。•活化缓冲液(最终):还原试剂(TCEP)必须在使用前添加到活化缓冲液中。示例:要制备活化缓冲液(最终),添加 20 µl 还原剂,5 ml 活化缓冲液。 • 对照钙蛋白酶 1:按照小瓶标签上的指示使用检测缓冲液稀释对照钙蛋白酶 1。要保持活性,对照钙蛋白酶 1 应该储存于 -70°C 。解冻并稀释后,应立即使用;稀释的酶可以在冰上保存数小时。

儲存和穩定性

自收到之日起,将对照人钙蛋白酶 1 储存于 -70°C,其余组件储存于 -20°C。除了对照人钙蛋白酶 1,所有组件一旦打开,都可以在 4°C 下保存长达 1 个月。

分析報告

阳性对照
钙蛋白酶 1

其他說明

Dainese, E., et al. 2002.J. Biol. Chem.277, 40296.
Glading, A., et al. 2000.J. Biol. Chem.275, 23908.
Ishikara, I., et al. 2000.Neurosci. Lett.279, 97.
Nakagawa, T. and Yuan, J. 2000.J. Cell Biol.150, 887.
Pariat, M., et al. 2000.Biochem.J.345, 129.
Pink, J.J., et al. 2000.Exp.Cell Res.255, 144.
Wang, K.K.2000.Trends Neurosci.23, 20.
Reddy, R.K., et al. 1999.J. Biol. Chem.274, 28476.
Leist, M., et al. 1998.Mol.Pharmacol.54, 789.
Melloni, E., et al. 1998.J. Biol. Chem.273, 12827.
Villa, P.G., et al. 1998.J. Cell Sci.111, 713.
Wood, D.E., et al. 1998.Oncogene17, 1069.
Kubbutat, M.H. and Vousden, K.H.1997.Mol.Cell Biol.17, 460.
Molinari, M. and Carafoli, E. 1997.J. Membr.Biol.156, 1.
Sorimachi, H., et al. 1997.生物化学。J.328, 721.
Squier, M.K. and Cohen, J.J.1997.J. Immunol.158, 3690.
Aoki, K., et al. 1986.FEBS Lett.205, 313.
Ohno, S., et al. 1986.Nucleic Acid Res.14, 5559.
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法律資訊

CALBIOCHEM is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

象形圖

Health hazard

訊號詞

Danger

危險聲明

危險分類

Repr. 1B

儲存類別代碼

6.1C - Combustible acute toxic Cat.3 / toxic compounds or compounds which causing chronic effects


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