Ensayos de esterilidad

Métodos de ensayo de esterilidad farmacéutica

Los métodos farmacopeicos para la realización de los ensayos de esterilidad de los productos farmacéuticos requieren que se cultiven muestras en dos medios distintos. En los ensayos de esterilidad se utilizan dos tipos diferentes de medios de cultivo para promover el crecimiento de los anaerobios residuales, así como de aerobios y hongos. El medio fluído tioglicolato (FTM) se utiliza normalmente para el cultivo de bacterias anaerobias y algunas aerobias, mientras que el medio de hidrolizado de caseína de soja (SCDM o TSB) suele utilizarse para cultivar hongos y bacterias aerobias. Las muestras se incuban durante 14 días a 32,5°C y 22,5°C respectivamente antes del examen. Cualquier turbidez en el medio de cultivo puede indicar crecimiento y debe investigarse. Se recomiendan dos métodos de ensayos de esterilidad para los productos farmacéuticos: filtración a través de membrana e inoculación directa.

Ensayos de esterilidad mediante filtración por membrana

Los ensayos de esterilidad mediante filtración por membrana constituyen el método normativo de elección para los productos farmacéuticos filtrables, tal como se cita en el USP <71>, la Farmacopea europea < 2.6.1> y la Farmacopea japonesa <4,06>. Se hacen pasar las muestras a través de una membrana de filtración de 0,45 µm en una unidad de filtración (canister) y se agrega medio de cultivo para la incubación. Este método de ensayo de esterilidad puede proporcionar una mayor sensibilidad en comparación con otros métodos, ya que la totalidad de la muestra o una muestra compuesta pasa a través de un único filtro. La filtración proporciona también la oportunidad de enjuagar los componentes de la muestra que puedan causar turbidez o inhibir el crecimiento, como los antibióticos o los conservantes.

Ensayos de esterilidad mediante inoculación directa

En la inoculación directa, se extrae asépticamente un pequeño volumen de muestra de la unidad de muestra y se inocula directamente en un volumen adecuado del medio de cultivo antes de ser incubado. Si bien es sencillo, este método de ensayo puede tener algunas limitaciones importantes. Sólo pueden inocularse en el medio de cultivo pequeñas cantidades de producto, lo que limita la sensibilidad de la prueba. Si la muestra aparece opaca o turbia después de la inoculación, puede ser difícil detectar la turbidez debido al crecimiento microbiano al final del periodo de incubación. Además, si el producto tiene propiedades antimicrobianas, la muestra debe ser neutralizada para que no se inhiba el crecimiento de microorganismos.

Métodos de ensayo de esterilidad para los productos médicos

Para los ensayos de esterilidad de los productos médicos se recomienda el método de transferencia directa. El dispositivo que va a analizarse está en contacto directo con los medios de cultivo durante todo el período de incubación, período en el cual crecerá y proliferará cualquier microorganismo que haya dentro o sobre el dispositivo. Además, se prefiere el ensayo de esterilidad por lavado para los productos con tubos huecos, como los equipos de transfusión y perfusión, donde la vía del líquido esté etiquetada como estéril. La luz del tubo se lava con un líquido de enjuague, el eluido se filtra a través de la membrana y se coloca en un medio adecuado para incubación.

Flujo de trabajo de los ensayos de esterilidad