Terreni e tamponi classici
Sono state messe a punto una serie di modifiche ai terreni di coltura in risposta alla necessità fornire ambienti fisiologicamente diversi per le diverse colture cellulari di mammifero. I nostri terreni e sali, insieme ai loro componenti, sono qualificati per applicazioni di coltura cellulare e prodotti nei nostri centri all’avanguardia. Scegli il terreno più adatto alla tua applicazione in base ai seguenti parametri:
|
|
DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium)
Il DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) è, tra i terreni definiti per la coltura di cellule e tessuti, quello maggiormente usato per molti fenotipi di cellule aderenti. La modificazione di Dulbecco consiste in una formulazione potenziata che aumenta fino a quattro volte il contenuto di determinati aminoacidi e vitamine rispetto al terreno originale Eagle. La nostra selezione comprende una gamma di diverse concentrazioni di glucosio, nonché formulazioni con e senza L-glutammina. Per le applicazioni sensibili agli estrogeni sono disponibili prodotti senza l'indicatore di pH rosso fenolo, sono inoltre disponibili formati liquidi pratici e pronti per l'uso, nonché terreni economici in polvere per una conservazione più semplice e duratura.
Terreni RPMI 1640
Così denominati in quanto sviluppati presso il Roswell Park Institute da Moore et al, i terreni RPMI 1640 sono ottimizzati per la coltura di cellule non aderenti, come i linfociti e altre cellule del sangue. La formulazione è basata sui terreni della serie RPMI 1630 con l’uso di un sistema tampone bicarbonato e modifiche delle quantità di aminoacidi e vitamine. Il terreno RPMI 1640 è stato utilizzato per la coltura di leucociti umani normali e neoplastici. Se adeguatamente integrata, questa formulazione ha dimostrato un'ampia applicabilità per supportare la crescita di molti tipi di cellule in coltura, inclusi linfociti umani nel test di stimolazione con fitoemoagglutinina (PHA) di 72 ore.
Formulazioni di terreno DMEM/F12
Negli ultimi anni, i ricercatori hanno riportato la coltura di diversi tipi di linee cellulari in terreni privi di siero con l’aggiunta di nutrienti, fattori di crescita e ormoni. Mather e Sato (BBRC, 1985) hanno riportato la coltivazione di cellule di Leydig e di Sertoli in terreno privo di siero contenente insulina, transferrina, fattore di crescita dell’epidermide, ormone luteinizzante o ormone follicolo-stimolante, somatomedina e ormone della crescita. Sebbene gli ormoni e le loro concentrazioni siano specifici per il tipo di cellula in esame, il terreno ritenuto ottimale per questi studi consisteva in una miscela 1:1 di terreno DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) e della miscela di nutrenti del terreno F-12 di Ham. Il tampone HEPES può essere incluso nella formulazione ad una concentrazione finale di 15 mM, per compensare la perdita di capacità tampone causata dall'eliminazione del siero.
MEM (Minimum Essential Medium)
Sviluppato da Harry Eagle presso l’NIH, l’MEM (Minimum Essential Medium) contiene amminoacidi essenziali universali per rispondere alle esigenze di specie diverse ed è uno dei terreni sintetici per colture cellulari più ampiamente utilizzati. I primi tentativi di coltivare normali fibroblasti di mammifero e alcuni subcloni di cellule HeLa hanno mostrato come questi tipi di cellule avessero requisiti nutrizionali specifici che non potevano essere soddisfatti dal comune terreno base di Eagle (BME). Studi successivi condotti su queste e altre cellule in coltura, indicarono che l’aggiunta di alcuni nutrienti al BME consentiva la crescita di una più ampia varietà di cellule. L’MEM, che incorpora queste modifiche, possiede concentrazioni di amminoacidi più elevate che lo rendono più adatto alla composizione proteica delle cellule di mammifero.
L’MEM è stato utilizzato per la coltivazione di un'ampia varietà di cellule che crescono in monostrato. Le possibilità di utilizzo di questo terreno sono state ampliate con aggiunta facoltativa di amminoacidi non essenziali a formulazioni contenenti anche sali di Hank o di Earle. La sua formulazione è stata ulteriormente modificata creando anche una versione priva di calcio, per consentire la crescita delle cellule in sospensione.
Formulazione dei terreni di Ham F-10 e F-12
Le miscele di nutrienti dei terreni di Ham sono state originariamente sviluppate per supportare la crescita di diversi cloni di cellule di ovaio di criceto cinese (CHO), nonché di cloni di cellule HeLa e di cellule-L di topo, ma sono risultate adatte anche per colture di epatociti, fusione virale e test di tossicità. Queste miscele sono state formulate per l'uso con o senza l’aggiunta di siero, a seconda del tipo di cellule coltivate.
- È stato dimostrato che il terreno di Ham F-10 supporta la crescita di cellule diploidi umane, globuli bianchi ed espianti di tessuti di ratto, coniglio e pollo.
- L'F-12 di Ham è stato utilizzato per la crescita degli epatociti primari di ratto e delle cellule epiteliali della prostata di ratto. È stato riportato il suo utilizzo in un test di tossicità su cloni di cellule CHO. Il terreno Ham F-12 è disponibile anche con HEPES 25 mM, che costituisce un tampone più efficace nell'intervallo di pH ottimale 7,2 - 7,4.
- La modifica di Coon del terreno F-12 di Ham è stata sviluppata per la coltura di cellule ibride prodotte mediante fusione virale. Questa modifica consiste in una concentrazione 2x di amminoacidi e di piruvato rispetto alla concentrazione standard, nell’aggiunta di acido ascorbico e in una modifica delle concentrazioni di sali. La formula di Coon contiene 0,863 mg/L di solfato di zinco, il che potrebbe renderlo inadatto alla coltura di cellule L di topo.
- La modifica di Kaighn dell'F-12 di Ham (chiamato anche Ham's F-12K) possiede maggiori concentrazioni di specifici amminoacidi e di piruvato, nonché sali modificati (formula di Konigsberg). Questo terreno è stato progettato per supportare la crescita di cellule differenziate di ratto e pollo, nonché di epatociti primari umani.
Terreno 199 (M199)
I primi terreni di coltura tissutale erano prevalentemente formulati a partire da prodotti di origine animale e/o estratti tissutali. Nel 1950, Morgan e collaboratori riportarono gli studi per la messa a punto di un terreno per colture cellulari rigorosamente definito. I loro esperimenti, condotti con varie combinazioni di vitamine, amminoacidi e altri fattori, dimostrarono che era possibile crescere un tessuto espiantato in quello che è oggi noto come terreno 199 (M199) e che è ancora ampiamente utilizzato in virologia, nella produzione di vaccini, nella coltura di espianti primari di tessuti e nella coltivazione in vitro di tessuti di epitelio pancreatico di topo e di cristallino di ratto.
I ricercatori capirono poi che la coltivazione a lungo termine delle cellule richiedeva l'aggiunta di un supplemento di siero al terreno di coltura. Se adeguatamente integrato, il terreno 199 può essere utilizzato su una ampia varietà di specie, in particolare per la coltivazione di cellule non trasformate.
Sali di base per colture cellulari
D-PBS, Hanks', Earle's, Tyrode's ─ troverai la formulazione ideale per la tua applicazione nella nostra collezione di sali bilanciati, la più completa attualmente disponibile.
Altri terreni di coltura classici
Scopri le nostre formulazioni speciali tra cui le modifiche ai terreni di Ames, Iscove e Glasgow, e inoltre Click, Fischer, L-15, McCoy, NCTC e altro ancora.
Per continuare a leggere, autenticati o crea un account.
Non hai un Account?