SCT150

Saggio HTS della luciferasi di lucciola

Glow-type luciferase assay for the quantification of firefly luciferase gene expression in mammalian cells with signal half-life of about 3 hours

• Sinonimo/i: Firefly Luciferase Assay, Bioluminescent Assay
• Codice UNSPSC: 12352207
• NACRES: NA.84

Proprietà

• tecniche: cell based assay: suitable
• Metodo di rivelazione: chemiluminescent
• Condizioni di spedizione: ambient

Descrizione

Descrizione generale

La luciferasi di lucciola è una proteina reporter molto usata per studiare la regolazione e la funzione genica e per lo screening di farmaci. Si tratta di un reporter genico molto sensibile, data l′assenza di attività luciferasica endogena nelle cellule o nei tessuti di mammifero. La luciferasi di lucciola è una proteina di 62.000 Dalton attiva come monomero e senza che siano necessarie successive modificazioni per la sua attività. L′enzima catalizza l′ossidazione ATP-dipendente della D-luciferina a ossiluciferina, con emissione luminosa centrata a 560 nm. La luce emessa in seguito alla reazione è direttamente proporzionale al numero di molecole di enzima luciferasi.

Tuttavia, l′emissione di luce dovuta alla reazione determina la formazione di adenil-ossiluciferina a livello della superficie dell′enzima, che ne determina l′autospegnimento. Ne consegue che l′emissione della luce ha un′emivita molto breve, con una cinetica di tipo “flash”. Il saggio HTS della luciferasi di lucciola contiene una miscela proprietaria di sostanze che modificano la reazione enzimatica producendo un segnale di maggior durata (luminescenza costante) perché previene la formazione di adenil-ossiluciferina a livello della superficie dell′enzima. Questo è un kit per il saggio omogeneo ad alta sensibilità del gene reporter della luciferasi di lucciola che permette di quantificare l′espressione della luciferasi di lucciola in cellule di mammifero caratterizzata da un′emivita del segnale di circa 3 ore. (Figura 2). I saggi della luciferasi di tipo “glow” emettono un segnale fluorescente meno intenso rispetto ai saggi di tipo “flash”. La sensibilità e il limite di rivelazione del saggio dipendono sia dai livelli di espressione nel sistema sperimentale in analisi sia dalla sensibilità del luminometro.

Applicazioni

Categoria della ricerca
Segnalazione cellulare

Saggio della luciferasi di lucciola

Saggio della luciferasi di tipo “glow” per la quantificazione dell′espressione del gene della luciferasi di lucciola in cellule di mammifero con emivita del segnale di circa 3 ore.

Sottocategoria di ricerca
Colorante per cellule vive

Componenti

1) Tampone di analisi (CS224524): 1X100 mL

2) D-luciferina (CS224523): 1 X 25 mg

Stato fisico

Liquido

Stoccaggio e stabilità

Conservare il saggio HTS della luciferasi di lucciola a -80°C. I componenti del kit sono stabili per almeno sei mesi dalla data di ricevimento se conservati come raccomandato. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento.

Esclusione di responsabilità

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Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 10 - Combustible liquids