MABE1095

Anticorpo anti-ibrido DNA-RNA, clone S9.6

clone S9.6, from mouse

• Sinonimo/i: DNA-RNA Duplex, DNA/RNA Duplex, DNA:RNA Duplex, DNA-RNA Hybrid, DNA/RNA Hybrid, DNA:RNA Hybrid, RNA-DNA Duplex, RNA/DNA Duplex, RNA:DNA Duplex, RNA-DNA Hybrid, RNA/DNA Hybrid, RNA:DNA Hybrid
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: mouse
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: purified immunoglobulin
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: S9.6, monoclonal
• Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia): all
• tecniche: ChIP: suitable; affinity binding assay: suitable; dot blot: suitable; immunocytochemistry: suitable; immunoprecipitation (IP): suitable
• Isotipo: IgG2aκ
• Condizioni di spedizione: ambient
• modifica post-traduzionali bersaglio: unmodified

Descrizione

Descrizione generale

Gli ibridi DNA-RNA sono presenti in natura all′interno delle cellule eucariote e raggiungono livelli elevati nei siti con elevata attività trascrizionale. Sono strutture con acidi nucleici non canonici, dotate di funzioni regolatorie trascrizionali. È stato riferito che la loro presenza predispone un locus alla rottura dei cromosomi. Un locus che forma un ibrido DNA-RNA crea una conformazione intermedia A/B a doppio filamento, con un secondo target per le proteine leganti acidi nucleici a singolo filamento sul filamento di DNA spostato complementare. Questi ibridi hanno mostrato di resistere all′attività delle DNA metiltransferasi. La formazione di ibridi DNA-RNA è stata associata a diverse malattie neurologiche. Le mutazioni dell′elicasi DNA-RNA senatassina (SETX) sono implicate nella forma giovanile dominante di sclerosi laterale amiotrofica di tipo 4 e in una forma recessiva di atassia con aprassia oculomotoria di tipo 2.

Specificità

Il clone S9.6 ha legato analogamente l′eteropolimero DNA-RNA e la poli(I)-poli(dC), ma per ottenere un grado di legame simile sono stati necessari livelli di poli(A)-poli(dT) maggiori di 100 volte. Il DNA a singolo filamento, il DNA e l′RNA a doppio filamento e l′RNA ribosomiale non sono stati legati dal clone S9.6 (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

La struttura eteroduplex DNA-RNA target (R-loop) non è specifica per sequenza o specie.

Immunogeno

Eteropolimero DNA-RNA duplex preparato mediante trascrizione del DNA a singolo filamento phi X174 con RNA polimerasi DNA-dipendente (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

Applicazioni

Analisi con metodica Dot Blot: 0,2 µg/mL di un lotto rappresentativo hanno rilevato un maggiore livello di ibridi DNA-RNA negli estratti genomici di un ceppo di lievito carente di RNasi H rispetto agli estratti di un ceppo wild type (per gentile concessione di Lorenzo Costantino, Ph.D., Koshland Lab, Università della California a Berkley, U.S.A.).

Saggio di legame per affinità: il clone S9.6 ha legato analogamente l′eteropolimero DNA-RNA e la poli(I)-poli(dC), ma per ottenere un grado di legame simile sono stati necessari livelli di poli(A)-poli(dT) maggiori di 100 volte. Il DNA a singolo filamento, il DNA e l′RNA a doppio filamento e l′RNA ribosomiale non sono stati legati dal clone S9.6 (Boguslawski, S.J., et al. (1986). J. Immunol Methods. 89(1):123-130).

Analisi con immunoprecipitazione della cromatina (ChIP): un lotto rappresentativo ha rilevato un maggior numero di ibridi DNA-RNA in corrispondenza di quattro geni trascritti attivamente dopo il knockdown mediato da shRNA di BRCA1 o BRCA2, ma non di PCID2 o RAD51, in cellule HeLa (Bhatia, V., et al. (2014). Nature. 511(7509):362-365).

Analisi con immunoprecipitazione della cromatina (ChIP): un lotto rappresentativo ha rilevato R-loop formati sul gene della beta-actina utilizzando una preparazione di cromatina da HeLa. Il trattamento della preparazione di cromatina con RNasi H ha impedito al clone S9.6 di provocare l′immunoprecipitazione dei frammenti target di cromatina (Skourti-Stathaki, K., et al. (2011). Mol. Cell. 42(6):794-805).

Analisi con sequenziamento e immunoprecipitazione della cromatina (ChIP-seq): un lotto rappresentativo ha rilevato la distribuzione a livello del genoma di ibridi DNA-RNA nel lievito gemmante mediante l′analisi ChIP-seq (El Hage, A., et al. (2014). PLoS Genet. 10(10):e1004716).

Analisi immunocitochimica: alcuni lotti rappresentativi hanno immunolocalizzato R-loop nucleari mediante la colorazione immunocitochimica fluorescente di cellule staminali embrionali umane H1 (hESC) fissate in metanolo e cellule HeLa fissate in formaldeide (Bhatia, V., et al.) (2014). Nature. 511(7509):362-365; Ginno, P.A., et al. (2012). Mol. Cell. 45(6):814-825).

Analisi con immunoprecipitazione: un lotto rappresentativo ha immunoprecipitato un substrato di R-loop trascritto in vitro (ibrido DNA-RNA), ma non il DNA a doppio filamento (dsDNA) (Ginno, P.A., et al. (2012). Mol. Cell. 45(6):814-825).

Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare

L′anti-ibrido DNA-RNA, clone S9.6, n. di catalogo MABE1095, è un anticorpo monoclonale di topo altamente specifico che mira all′ibrido DNA-RNA ed è stato testato mediante saggio di legame per affinità, immunoprecipitazione della cromatina (ChIP), ChIP-seq, Dot Blot, immunocitochimica e immunoprecipitazione.

Qualità

Valutata mediante immunocitochimica in cellule HeLa.

Analisi immunocitochimica: una diluizione 1:50 di questo anticorpo ha immunolocalizzato ibridi DNA-RNA nucleari e mitocondriali nel 4% delle cellule HeLa fissate in paraformaldeide e nello 0,3% di quelle permeabilizzate con Triton X-100.

Stato fisico

Formato: purificato

IgG2a di topo purificataκ in tampone contenente 0,1 M di Tris-glicina (pH 7,4), 150 M di NaCl con lo 0,05% di sodio azide.

Purificato con proteina G.

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 1 anno a 2-8 °C dalla data di ricezione.

Altre note

Concentrazione: consultare la scheda tecnica specifica del lotto.

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable