ABE1462

Anticorpo anti-fosfo LSD1 (Ser 112)

from rabbit, purified by affinity chromatography

• Sinonimo/i: Lysine-specific histone demethylase 1A, Ser 112 phosphorylated, BRAF35-HDAC complex protein BHC110, Ser 112 phosphorylated, Flavin-containing amine oxidase domain-containing protein 2, Ser 112 phosphorylated
• Codice UNSPSC: 12352203
• eCl@ss: 32160702
• NACRES: NA.41

Proprietà

• Origine biologica: rabbit
• Livello qualitativo: 100
• Forma dell’anticorpo: affinity isolated antibody
• Tipo di anticorpo: primary antibodies
• Clone: polyclonal
• Purificato mediante: affinity chromatography
• Reattività contro le specie: human, mouse
• Reattività contro le specie (prevista in base all’omologia): rat (based on 100% sequence homology), porcine (based on 100% sequence homology), zebrafish (based on 100% sequence homology), rhesus macaque (based on 100% sequence homology)
• tecniche: dot blot: suitable; western blot: suitable
• N° accesso NCBI: NP_598633
• N° accesso UniProt: Q6ZQ88
• Condizioni di spedizione: wet ice
• modifica post-traduzionali bersaglio: phosphorylation (pSer112 )
• Informazioni sul gene: human ... KDM1A(23028)

Descrizione

Descrizione generale

La demetilasi istonica 1A lisina-specifica (UniProt Q6ZQ88; detta anche proteina BHC110 del complesso BRAF35-HDAC, proteina 2 contenente il dominio dell′ammina ossidasi contenente flavina) nelle specie murine è codificata dal gene Kdm1a (detto anche Aof2, Kiaa0601, Lsd1) (Gene ID 99982). La demetilasi lisina-specifica dipendente da FAD+ (LSD1) fa parte dei complessi del co-repressore REST (CoREST) che mediano la repressione genica catalizzando la demetilazione dell′istone H3 Lys4 mono- e dimetilato (H3K4me1/2) La proteina LSD1 è coinvolta anche nel processo di attivazione genica associata ai recettori nucleari attraverso la demetilazione di H3K9me1/2. Inoltre, è noto che LSD1 demetila i substrati non-istonici come p53 e Dnmt1. È stato riportato che, una volta fosforilata in Ser112 a opera della PKC-alfa, la proteina LSD1 media la regolazione dell′orologio circadiano dipendente dalla via di trasduzione del segnale della PKC-alfa. La fosforilazione in Ser112 induce l′interazione di LSD1 con CLOCK:BMAL1 facilitando l′attivazione della trascrizione dipendente dall′E-box. È stato riportato che il knock-out degli alleli Lsd1(SA/SA) codificanti per la proteina LSD1 mutante S112A difettiva per la fosforilazione in topi portatori alterava il ritmo circadiano del comportamento locomotorio con attenuazione dell′espressione ritmica dei principali geni dell′orologio e comprometteva il rifasamento dell′orologio circadiano.

Specificità

La numerazione della Ser112 si riferisce alla sequenza della proteina KDM1A/LSD1 di topo (UniProt Q6ZQ88). La Ser112 murina equivale alla Ser111 umana e alla Ser106 di ratto (UniProt O60341 & F1MA31). La specificità di questo anticorpo policlonale è stata confermata mediante saggio di Dot Blot, usando il peptide immunogeno e il peptide non fosforilato corrispondente, e mediante saggio di Western blotting per rivelare la fosforilazione del bersaglio indotta da PMA (forbolo-miristato-acetato). Il trattamento del lisato cellulare con fosfatasi lambda prima del saggio di Western blotting ha impedito totalmente di evidenziare la banda di interesse (Nam, H.J., et al. (2014). Mol. Cell 53:791-805).

Immunogeno

Epitopo: pSer112.

Peptide lineare corrispondente a una sequenza della proteina LSD1 di topo fosforilata in Ser112.

Applicazioni

L′anticorpo anti-fosfo-LSD1 (Ser112) è un anticorpo indirizzato contro la proteina LSD1 fosforilata (in Ser112) per l′uso nei saggi di Western blotting e Dot Blot.

Saggio Dot Blot: un lotto rappresentativo ha permesso di rivelare il peptide immunogeno fosforilato in Ser112 (equivalente a pSer111 umana) ma non il corrispondente peptide non fosforilato in Ser112 (Nam, H.J., et al. (2014). Mol. Cell 53:791-805).
Analisi mediante Western blotting: un lotto rappresentativo ha permesso di riscontrare l′induzione della fosforilazione della proteina LSD1 umana espressa in modo esogeno in seguito a trattamento con PMA di cellule HEK293T transfettate e deprivate di siero (starved) per 24 ore. La presenza della proteina LSD1 fosforilata è stata evidenziata nella frazione nucleare ma non in quella citosolica, e il concomitante trattamento con l′inibitore di PKC Go 6976 (N° Cat. 365250) preveniva la fosforilazione indotta da PMA della proteina LSD1 umana (Nam, H.J., et al. (2014). Mol. Cell 53:791-805).
Analisi mediante Western blotting: un lotto rappresentativo ha permesso di rilevare il livello di fosforilazione tempo-dipendente della proteina LSD1 in estratti epatici di topi mantenuti sempre al buio (ciclo DD). Analogamente, in estratti nucleari di fibroblasti embrionali di topo (MEF), ottenuti in momenti diversi dopo l′induzione della trascrizione di geni circadiani mediante trattamento con desametasone, è stato osservato un andamento simil-circadiano dell′oscillazione del livello di fosforilazione di LSD1 (Nam, H.J., et al. (2014). Mol. Cell 53:791-805).

Qualità

Valutata mediante saggio di Western blotting in lisato di cellule HEK293T che sovraesprimono la proteina LSD1 umana.

Analisi mediante Western blotting: questo anticorpo alla diluizione 1:500 ha permesso di rivelare la fosforilazione indotta da PMA della proteina LSD1 umana espressa in modo esogeno da cellule HEK293T transfettate e deprivate di siero (starved) per 24 ore. Il trattamento della membrana con fosfatasi lambda prima dell′aggiunta dell′anticorpo ha impedito totalmente di evidenziare la banda di interesse.

Descrizione del bersaglio

Visualizzato a ~115 kDa. 92,90/95,16 kDa (isoforma 1/2 umana), 92.85 (topo) e 94.60 kDa (ratto) calcolato. In alcuni lisati possono comparire una o più bande non caratterizzate.

Altre note

Concentrazione: fare riferimento alla scheda tecnica specifica del lotto.

Informazioni sulla sicurezza

• Codice della classe di stoccaggio: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe di pericolosità dell'acqua (WGK): WGK 1
• Punto d’infiammabilità (°F): Not applicable
• Punto d’infiammabilità (°C): Not applicable