Descrizione generale
La proteina SMAD-1 (Mothers against decapentaplegic homolog 1, UniProt Q15797; detta anche BSP-1, hSMAD1, JV4-1, MAD homolog 1, Mothers against DPP homolog 1, Mad-related protein 1, SMAD 1, SMAD family member 1, Smad1, Transforming growth factor-beta-signaling protein 1) nell'uomo è codificata dal gene SMAD1 (denominato anche BSP1, MADH1, MADR1) (Gene ID 4086). Nei mammiferi, le SMAD sono una famiglia di fattori di trascrizione suddivise in tre gruppi. SMAD1, 2, 3, 5 e 9 (detta anche SMAD8) sono SMAD regolate da recettori e sono denominate anche R-SMAD. SMAD4, detto anche Co-SMAD, è l'unico SMAD noto che nei mammiferi funge da co-mediatore intervenendo nelle vie di trasduzione del segnale del TGF e di BMP. SMAD6 e SMAD7 sono SMAD di tipo inibitorio, detti anche I-SMAD, che bloccano l'attivazione degli R-SMAD da parte del Co-SMAD attraverso un legame competitivo. Le proteine SMAD sono caratterizzate da una struttura simile costituita dai domini conservati N-terminali MH1 (Mad-homology 1; a.a. 12-136 di hSMAD1, a.a. 13-137 di hSMAD2, a.a. 16-140 di hSMAD8) e C-terminali MH2 (a.a. 271-465 di hSMAD1 & hSMAD2, a.a. 273-467 di hSMAD8) uniti da una regione linker non conservata tra le SMAD. Negli R-SMAD e Co-SMAD il dominio MH1 contiene le sequenze segnale N-terminali per la localizzazione nel nucleo (NLS), mentre in SMAD4 tale dominio è occupato dalle sequenze segnale di esportazione dal nucleo (NES). Il dominio MH2, oltre a essere responsabile della transattivazione genica, interviene mediando le interazioni tra SMAD-recettore, SMAD-SMAD, SMAD-coattivatori e SMAD-corepressori. Il ligando interessato (TGF nel caso di SMAD2/3 e BMP nel caso di SMAD1/5/8) induce la trasduzione del segnale legandosi e occupando le serin/treonin-chinasi del recettore per TGF-beta di tipo I e II (T-beta-RI e T-beta-RII) presente sulla superficie cellulare, consentendo la fosforilazione T-beta-RI-dipendente del dominio della T-beta-RI-chinasi, che a sua volta induce la trasduzione del segnale fosforilando gli ultimi due residui di serina presenti all'interno del motivo finale C-terminale conservato Ser-Ser-X-Ser (SSXS) delle proteine SMAD.
Specificità
Questo anticorpo policlonale di coniglio riconosce le proteine SMAD1/5/8 fosforilate negli ultimi due residui di serina all'interno del motivo finale C-terminale Ser-Ser-X-Ser (SSXS). I residui di serina di interesse sono presenti nella proteina SMAD1 di uomo/topo (S463/S465), SMAD1 di ratto (S466/S468), SMAD5 di uomo/topo/ratto (S463/S465), SMAD9 di uomo (S465/S467), SMAD9 di topo (S428/S430) e SMAD9 di ratto (S432/S434), ma sono assenti nell'isoforma di splicing alternativo 2 della SMAD1 di uomo. SMAD9 è denominata anche SMAD8. La rivelazione delle bande di interesse è stata bloccata aggiungendo il fosfopeptide immunogeno ma non quando è stato aggiunto il corrispondente peptide non fosforilato.
Immunogeno
Epitopo: C-terminale
Peptide lineare coniugato con KLH corrispondente alla sequenza finale C-terminale della proteina SMAD1 umana fosforilata negli ultimi due residui di serina (S463/S465).
Applicazioni
Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare
L'anticorpo anti-fosfo-SMAD1/SMAD5/SMAD8 (Ser463/465), N° Cat. AB3848-I, è un anticorpo policlonale di coniglio altamente specifico diretto contro la fosforilazione di SMAD1/5/8 e il suo uso è stato testato in saggi di immunoistochimica e di Western Blotting.
Saggio immunoistochimico: un lotto rappresentativo alla diluizione 1:50 ha permesso di rivelare la fosforilazione di SMAD1/5/8 in sezioni tissutali di embrioni di topo e di ratto.
Qualità
Valutata mediante Western blotting in lisato di cellule HEK293.
Saggio di Western blotting: una diluizione 1:500 di questo anticorpo ha rivelato un'aumentata fosforilazione di SMAD1/5/8 in 10 µg di lisato di cellule HEK293 trattate con BMP2. La rivelazione delle bande di interesse è stata bloccata aggiungendo il fosfopeptide immunogeno ma non quando è stato aggiunto il corrispondente peptide non fosforilato.
Descrizione del bersaglio
Visualizzato a ~55 kDa. 52,26/52,16/52,71 kDa (SMAD1 di uomo/topo/ratto ), 52,26/52,17/52,22 kDa (SMAD5 di uomo/topo/ratto) e 52,49/48,64/48,99 kDa. In alcuni lisati possono essere osservate bande non caratterizzate.
Stato fisico
Anticorpo policlonale purificato di coniglio in tampone contenente Tris-glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150 mM con azoturo di sodio 0,05%.
Purificato per affinità.
Stoccaggio e stabilità
Stabile per 1 anno a 2-8 °C dalla data di ricevimento.
Altre note
Concentrazione: fare riferimento alla scheda tecnica specifica del lotto.
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