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17-10489

Sigma-Aldrich

Set ChIPAb+ per il recettore androgenico - Anticorpi convalidati per ChIP e set di primer

from rabbit, purified by affinity chromatography

Sinonimo/i:

Dihydrotestosterone receptor, Nuclear receptor subfamily 3 group C member 4, DHTR, NR3C4, AR

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About This Item

Codice UNSPSC:
12352203
eCl@ss:
32160702
NACRES:
NA.32

Origine biologica

rabbit

Livello qualitativo

Clone

polyclonal

Purificato mediante

affinity chromatography

Reattività contro le specie

rat, amphibian, bovine, human, mouse, chicken

Produttore/marchio commerciale

ChIPAb+
Upstate®

tecniche

ChIP: suitable
immunohistochemistry: suitable
immunoprecipitation (IP): suitable
western blot: suitable

N° accesso NCBI

N° accesso UniProt

Condizioni di spedizione

dry ice

Descrizione generale

Il recettore androgenico (AR) è un tipo di recettore nucleare che viene attivato dal legame con uno degli ormoni androgeni testosterone o diidrotestosterone. La sua funzione principale è quella di fattore di trascrizione che, legandosi al DNA, regola l'espressione genica. Tuttavia, il recettore androgenico svolge anche altre funzioni indipendenti dal legame con il DNA. Esso è strettamente correlato al recettore del progesterone e i progestinici, a dosi elevate, possono bloccarlo.
Per tutti gli anticorpi ChIPAb+ ogni lotto viene sempre convalidato singolarmente per la precipitazione della cromatina. Ogni set di anticorpi ChIPAb+ include primer di controllo (ogni lotto testato mediante qPCR) il che consente di convalidare biologicamente i risultati di IP in un contesto locus-specifico. Per permettere ai ricercatori di convalidare i protocolli di ChIP quando usano i nostri anticorpi nel loro contesto cromatinico specifico, mettiamo a loro disposizione anche il protocollo della qPCR e le sequenze dei primer. Ogni set include anche un anticorpo di controllo negativo per verificare la specificità della reazione di ChIP.
Il set ChIPAb+ per il recettore androgenico comprende l′anticorpo anti-recettore androgenico, IgG di coniglio normale e i primer di controllo che amplificano una regione di 85 pb della regione enhancer dell′antigene specifico prostatico umano (PSA). L′anticorpo anti-recettore androgenico e i controlli negativi sono forniti in un formato di reazione "per ChIP" scalabile e possono essere utilizzati per convalidare funzionalmente la precipitazione della cromatina associata al recettore androgenico.

Specificità

Riconosce il recettore androgenico. Nessuna reattività crociata con i recettori per estrogeni, progesterone o glucocorticoidi.

Immunogeno

Peptide corrispondente agli amminoacidi 1-21 del recettore androgenico umano (MEVQLGLGRVYPRPPSKTYRG)

Applicazioni

Immunoprecipitazione della cromatina:
cellule LNCaP sono state deprivate di ormoni per 72 ore, quindi indotte per una notte con CI-4AS-1 1 µM. La ChIP è stata effettuata con ~1e5 equivalenti di cellule per IP utilizzando 1 µg di IgG di coniglio normale (N° Comp PP64B) o 1 µg di anti-recettore androgenico (N° Comp. CS207339) e il kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460). La riuscita dell′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati al recettore androgenico è stata confermata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per il PSA (N° Comp. CS207340) come locus positivo e per il promotore del gene GAPDH (N° Comp. 22-004) come locus negativo. I dati sono presentati come input percentuale di ciascun campione IP rispetto all′input di cromatina per ciascun amplicone e campione ChIP come indicato.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460) o del kit EZ-MagnaChIP HiSens (N° Cat. 17-10461).

Immunoprecipitazione della cromatina:
cellule LNCaP sono state deprivate di ormoni per 72 ore, quindi indotte per una notte con mezzo disperdente (non trattate) o con CI-4AS-1 1 µM (trattate). La ChIP è stata effettuata con ~ 1e5 equivalenti di cellule per IP utilizzando 3 µg di IgG di coniglio normale (N° Comp PP64B) o 3 µg di anti-recettore androgenico (N° Comp. CS207339) e il kit Magna ChIP HiSens (N° Cat. 17-10460). La riuscita dell′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati al recettore androgenico è stata confermata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per il PSA (N° Comp. CS207340) come locus positivo; il locus negativo era il set di primer HNRP2AB1. Sono riportati i calcoli della delta delta Ct che rende conto dell′arricchimento in numero di volte nel locus positivo rispetto al locus negativo.
Per i dettagli sperimentali, consultare i protocolli del kit MagnaChIP HiSens (N° Cat. 17-10460) o del kit EZ-MagnaChIP HiSens (N° Cat. 17-10461).

Saggio di Western Blotting:
Una diluizione 1:200-1:500 di questo anticorpo ha rivelato il recettore degli androgeni in lisati in tampone per RIPA di 20 μg di cellule LNCaP umane.

Immunoprecipitazione:
un lotto rappresentativo ha immunoprecipitato il recettore per gli androgeni da 500 μg di lisato di cellule LNCaP in tampone per RIPA.

Immunocitochimica:
una diluizione 1:50 di un lotto rappresentativo ha prodotto immunocolorazione positiva per il recettore per gli androgeni in cellule LNCaP fissate con formaldeide al 2%/ acido acetico al 5% e permeabilizzate con Triton X-100 allo 0,1%.
Categoria di ricerca
Epigenetica & funzione nucleare
Il set ChIPAb+ &per il recettore per gli androgeni comprende l′anticorpo anti-recettore androgenico&, IgG di coniglio normale & e i primer di controllo che amplificano una regione di 85 pb della regione enhancer dell′antigene specifico prostatico umano (PSA).
Sottocategoria di ricerca
Fattori di trascrizione

Confezionamento

25 saggi per set. Uso raccomandato: ~1 µg di anticorpo per una immunoprecipitazione di cromatina (a seconda del contesto biologico).

Qualità

Immunoprecipitazione della cromatina:
la cromatina sonicata preparata da cellule LNCaP deprivate di ormoni (72H), poi indotte (CI-4AS-1 1 µM) per una notte (~1e5 equivalenti di cellule per IP) sono state sottoposte a immunoprecipitazione della cromatina utilizzando 1 µg di IgG di coniglio normale (N° Comp. PP64B) o 1 µg di anti-recettore androgenico (N° Comp. CS207339) e il kit Magna ChIP® HiSens (N° Cat. 17-10460). La riuscita dell′immunoprecipitazione dei frammenti di DNA associati al recettore androgenico è stata confermata mediante qPCR utilizzando i primer per ChIP specifici per il PSA (N° Comp. CS207340).
Per i dettagli sperimentali consultare il protocollo del kit MagnaChIP HiSens (N° Cat. 17-10460) o del kit EZ-MagnaChIP HiSens (N° Cat. 17-10461).

Stato fisico

Anticorpo anti-recettore androgenico (policlonale di coniglio), N° Comp. CS207339. Un flaconcino contenente 125 µL (0,2 µg/ µL) di anticorpi policlonali di coniglio purificati in tampone contenente Tris-Glicina 0,1 M (pH 7,4), NaCl 150mM e azoturo di sodio allo 0,05%, prima dell′aggiunta del glicerolo al 30%. Conservare a -20°C.

IgG di coniglio normale, N° Comp. PP64B. Un flaconcino contenente 125 µg (1,0 µg/ µL) di IgG di coniglio in 125 µL di tampone di conservazione con lo 0,05% di azoturo di sodio. Conservare a -20°C.

Primer per ChIP, PSA. N° Comp. CS207340. Una microprovetta contenente 75 μL di ciascun primer specifico per la regione enhancer dell′antigene specifico prostatico umano 5 μM. (chr19:51354179+51354263, build hg19) Conservare a -20°C.
FOR: 5’ GCC TGG ATC TGA GAG AGA TAT CAT C 3’
REV: 5’ ACA CCT TTT TTT TTC TGG ATT GTT G 3’
Purificazione per immunoaffinità

Stoccaggio e stabilità

Stabile per 1 anno a -20°C dalla data di ricevimento. Indicazioni per l'uso: dopo il primo scongelamento, prima di rimuovere il tappo, centrifugare il contenitore e mescolare delicatamente la soluzione. suddividere in aliquote in provette da microcentrifuga e conservare a -20°C. Evitare ripetuti cicli di congelamento e scongelamento che potrebbero danneggiare le IgG e compromettere le prestazioni del prodotto.

Risultati analitici

Controllo
Include IgG di coniglio normale e i primer specifici per la regione enhancer dell′antigene specifico prostatico umano (PSA).

Note legali

MAGNA CHIP is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
UPSTATE is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Esclusione di responsabilità

Salvo diversa indicazione nel nostro catalogo o in altra documentazione fornita dall′azienda insieme al prodotto, i nostri prodotti sono destinati esclusivamente a scopi di ricerca e non devono essere utilizzati per altre finalità, inclusi a titolo esemplificativo ma non esaustivo, fini commerciali non autorizzati, applicazioni diagnostiche in vitro, usi terapeutici ex vivo o in vivo o qualsiasi altro tipo di assunzione o applicazione rivolta agli esseri umani o agli animali.

Codice della classe di stoccaggio

10 - Combustible liquids


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