T8003

Trypsine from bovine pancreas

Type I, ~10,000 BAEE units/mg protein

• Numéro CAS: 9002-07-7
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-650-8
• Numéro MDL: MFCD00082094
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Type: Type I
• Niveau de qualité: 200
• Forme: solid
• Activité spécifique: ~10,000 BAEE units/mg protein
• Poids mol.: 23.8 kDa
• Composition: protein, 90-100%
• Solubilité: hydrochloric acid: soluble 1 mM, clear
• Activité étrangère: Chymotrypsin ≤4 BTEE units/mg protein
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

Pour la digestion de peptides par la trypsine, utiliser un rapport trypsine/peptide d′environ 1/100 à 1/20. Ce produit est généralement utilisé pour détacher les cellules adhérentes d′une surface de culture. La concentration en trypsine nécessaire pour déloger les cellules de leur substrat dépend principalement du type de cellules et de l′ancienneté de la culture. La trypsine a également été utilisée pour remettre en suspension des cellules lors d′une culture cellulaire, en recherche protéomique pour la digestion de protéines et dans diverses digestions en gel. Parmi ses autres applications, on peut citer l′évaluation de la cristallisation par des techniques à base de membrane et la détermination du fait que les vitesses et les rendements de repliement des protéines peuvent être limités par la présence de pièges cinétiques.

Actions biochimiques/physiologiques

La trypsine clive les peptides du côté C-terminal des résidus de lysine et d′arginine. La vitesse d′hydrolyse de cette réaction diminue si l′un ou l′autre côté du site de clivage comporte un résidu acide, et l′hydrolyse est interrompue si un résidu de proline se trouve du côté carboxyle du site de clivage. L′activité trypsine est optimale à pH 7-9. La trypsine peut également cliver les liaisons ester et amide des dérivés synthétiques des acides aminés. De l′EDTA est ajouté aux solutions de trypsine pour servir d′agent chélateur, afin de neutraliser les ions calcium et magnésium qui dissimulent les liaisons peptidiques sur lesquelles la trypsine agit. L′élimination de ces ions augmente l′activité enzymatique.

Les inhibiteurs de protéase à sérine, notamment le DFP, la TLCK, l′APMSF, l′AEBSEF et l′aprotinine, inhibent la trypsine.

Composants

Trypsin consists of a single chain polypeptide of 223 amino acid residues, produced by the removal of the N-terminal hexapeptide from trypsinogen which is cleaved at the Lys - lle peptide bond. The sequence of amino acids is cross-linked by 6 disulfide bridges. This is the native form of trypsin, beta-trypsin. BETA-trypsin can be autolyzed, cleaving at the Lys - Ser residue, to produce alpha-trypsin. Trypsin is a member of the serine protease family.

Attention

Solutions in 1 mM HCl are stable for 1 year in aliquots and stored at -20°C. The presence of Ca²⁺ will also diminish the self-autolysis of trypsin and maintain its stability in solution. Trypsin will also retain most of its activity in 2.0 M urea, 2.0 M guanidine HCl, or 0.1% (w/v) SDS.

Définition de l'unité

Une unité de BAEE produit une A₂₅₃ de 0,001 par minute à pH 7,6 et à 25 °C lorsque le BAEE est utilisé comme substrat.

Notes préparatoires

Soluble in 1 mM HCl at 1 mg/mL.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS07,GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H315 - H319 - H334 - H335
• Conseils de prudence: P261 - P264 - P271 - P280 - P302 + P352 - P305 + P351 + P338
• Classification des risques: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• Organes cibles: Respiratory system
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 1
• Équipement de protection individuelle: dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves