P4850

Protéinase K from Tritirachium album

buffered aqueous glycerol solution, for molecular biology, ≥800 units/mL

• Synonyme(s) : Endopeptidase K
• Numéro CAS: 39450-01-6
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.4.21.64 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro MDL: MFCD00132129
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Qualité: for molecular biology
• Niveau de qualité: 200
• Forme: buffered aqueous glycerol solution
• Poids mol.: 28.93 kDa
• Concentration: ≥10 mg/mL; ≥800 units/mL
• Impuretés: ≤0.5 ppm DNA (PicoGreen^® assay)
• Activité étrangère: DNase, Nickase and RNase, none detected
• Température de stockage: 2-8°C

Description

Application

Utile pour l′inactivation protéolytique des nucléases lors de l′isolement de l′ADN et de l′ARN.
Élimine les endotoxines qui se lient aux protéines cationiques telles que le lysozyme et la ribonucléase A.
S′est avéré utile pour l′isolement des mitochondries hépatiques, de levure et de haricot mungo.
Détermination de la localisation des enzymes sur les membranes.
Traitement des coupes de tissus incluses en paraffine pour exposer les sites de liaison à l′antigène pour le marquage par anticorps.
Digestion des protéines des échantillons de tissu cérébral pour la recherche sur les prions responsables des encéphalopathies spongiformes transmissibles (EST).

Proteinase K from Tritirachium album has been used:

• in bovine endometrial epithelial cells for herpes viral DNA extraction
• for viral RNA extraction from nasal swabs
• as a component of phase lock and direct PCR lysis buffer

The product has been used to study its pre-treatment effects on the silk fibroin. The aspects analysed in this study included the crystallographic properties of hydroxyapatite (HAp), and the microstructure and microhardness of the composites. The enzyme has also been used to facilitate the access of probes to rRNA using FISH techniques to detect pathogenic Staphylococcus aureus.

Actions biochimiques/physiologiques

Proteinase K has a broad specificity and degrades many proteins even in the native state. It mainly cleaves the peptide bond adjacent to the carboxyl group of aliphatic and aromatic amino acids with blocked α-amino groups. The molecular weight of proteinase K from amino acid sequence is found to be 28,930 Da and from SDS-PAGE, it is found to be 28,500 Da. The optimum pH is between 7.5-9.0 and its isoelectric point is 8.9. Ca²⁺ (1-5 mM) is required for its activation. Proteinase K is inhibited by DIFP (diisopropylfluorophosphate) or PMSF (phenylmethylsulfonyl fluoride).

La protéinase K est une sérine protéase très stable et hautement réactive. Des études de cristallographie et de structure moléculaires ont indiqué que cette enzyme appartient à la famille des subtilisines, présentant une triade catalytique au site actif (Asp³⁹-His⁶⁹-Ser²²⁴). Elle est stable dans un vaste éventail d′environnements : pH, sels de tampon, détergents (SDS) et température. En présence de 0,1 à 0,5 % de SDS, la protéinase K reste active et peut digérer diverses protéines et nucléases dans les préparations d′ADN, sans compromettre l′intégrité de l′ADN isolé.

Définition de l'unité

One unit will hydrolyze urea-denatured hemoglobin to produce color equivalent to 1.0 μmole of tyrosine per min at pH 7.5 at 37 °C (color by Folin-Ciocalteu reagent).

Forme physique

Solution in 40% glycerol (v/v) containing 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, with 1 mM calcium acetate.

Informations légales

PicoGreen is a registered trademark of Life Technologies

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 10 - Combustible liquids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 2
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Faceshields, Gloves, type ABEK (EN14387) respirator filter