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Roche

cOmplete™ Lysis-M

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About This Item

Code UNSPSC :
12352204
Nomenclature NACRES :
NA.21

Fabricant/nom de marque

Roche

Température de stockage

room temp

Description générale

Le réactif d'extraction des protéines des cellules de mammifères cOmplete™ Lysis-M contient un détergent doux prêt à l'emploi (dans un tampon bicine 25 mM, pH 7,6) qui lyse efficacement les cellules de mammifères et élimine le besoin de grattage, de sonication ou de cycles de congélation-décongélation. Il est nécessaire pour extraire en douceur les protéines du cytoplasme et du noyau des cellules de mammifères en culture. Les rendements en protéines obtenus avec ce kit sont de 20 à 25 % plus élevés par rapport à trois cycles de congélation-décongélation, et d'environ 20 % plus élevés que 2 minutes de sonication (avec une impulsion de 50 %). Les protéines extraites peuvent être purifiées ou analysées dans des applications en aval. Une lyse efficace des cellules de mammifères se produit en seulement 5 minutes à température ambiante.
Les pastilles prêtes à l'emploi du cocktail d'inhibiteurs de protéases cOmplete™ Mini inclus dans le kit, fonctionnent de manière optimale avec le réactif du kit′ Lysis-M. Les pastilles d′inhibiteurs de protéases cOmplete™ Mini inhibent un large éventail de protéases à sérine et à cystéine et de métalloprotéases, ainsi que les calpaïnes. Le réactif cOmplete™ Lysis-M aide à l'extraction des protéines et inhibe simultanément l'activité protéasique pendant les premières étapes de l'extraction. Les pastilles d′inhibiteurs de protéases cOmplete™ Mini contiennent de l′EDTA ainsi que des inhibiteurs de protéases réversibles et irréversibles.

Application

Le réactif Lysis-M est compatible avec de nombreuses applications différentes :
  • tests rapporteurs (p. ex., β-galactosidase, luciférase, chloramphénicol acétyltransférase)
  • immunoessais (p. ex., Western blots, ELISA, RIA)
  • dosages des protéines (p. ex., protéine kinase A, protéine kinase C, et tyrosine kinase)
  • purification des protéines
En outre, le lysat cellulaire est compatible avec les dosages de protéines telles que la coloration de Coomassie et les dosages de protéines au BCA (2′-benzoyloxycinnamaldéhyde), et le réactif peut être éliminé par dialyse.
Remarque : les pastilles cOmplete™ Mini (incluses dans le) contiennent de l′EDTA (acide éthylène diamine tétra-acétique). Si la protéine d'intérêt est purifiée par IMAC (chromatographie d'affinité sur ions métalliques immobilisés), p. ex. les protéines recombinantes avec étiquette Poly-His, l'EDTA doit être éliminé (par dialyse par exemple) avant la chromatographie. Il est également possible d′utiliser le produit cOmplete™ Lysis-M sans EDTA.

Caractéristiques et avantages

  • Préserve la structure des protéines, car les réactifs ne dénaturent pas ou n'altèrent pas les protéines d′une autre manière.
  • Permet des économies, puisqu'un seul produit protège contre de nombreuses protéases.
  • Permet de gagner des étapes, puisque les protéines extraites peuvent être utilisées directement dans de nombreuses procédures en aval.

Conditionnement

1 kit contenant 2 composants. Chaque pastille est suffisante pour 10 ml d'extrait. Pour lyser jusquà 100 g de cellules de mammifère.

Notes préparatoires

Utilisation prévue : extraction et protection simultanées des protéines solubles des cellules de mammifères.
Échantillon : cellules de mammifères en culture (par exemple, cellules Cos-7, récoltées à confluence).
Temps nécessaire : 5 minutes (lyse des cellules à la température ambiante).
Nombre d′extractions : 20 (10 ml chacune).
Efficace contre : les protéases à sérine, les protéases à cystéine, les métalloprotéases.
Remarque : chaque pastille cOmplete Mini est suffisamment concentrée pour inhiber les protéases dans 10 ml d'extrait.

Autres remarques

Produit destiné uniquement à la recherche en sciences de la vie. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.

Informations légales

cOmplete is a trademark of Roche

Composants de kit seuls

Réf. du produit
Description
  • Lysis-M Reagent for protein extraction from mammalian cells
  • cOmplete Mini Protease Inhibitor Cocktail Tablets supplied in EASYpacks

Pictogrammes

Exclamation mark
GHS07

Mention d'avertissement

Warning

Mentions de danger

H315 - H319

Classification des risques

Eye Irrit. 2 - Skin Irrit. 2

Code de la classe de stockage

12 - Non Combustible Liquids

Classe de danger pour l'eau (WGK)

WGK 2

Point d'éclair (°F)

does not flash

Point d'éclair (°C)

does not flash

Certificats d'analyse (COA)

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Bryan M Ham et al.
Journal of proteome research, 7(6), 2215-2221 (2008-04-17)
Ongoing optimization of proteomic methodologies seeks to improve both the coverage and confidence of protein identifications. The optimization of sample preparation, inclusion of technical replicates (repeated instrumental analysis of the same sample), and biological replicates (multiple individual samples) are crucial

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cOmplete™ Lysis-M Protocol & Troubleshooting

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