17-10229
Biocapteur lentiviral LentiBrite Histone H2B-GFP
Synonyme(s) :
Histone H2B, Histone H2B GFP Biosensor
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About This Item
Code UNSPSC :
12352207
eCl@ss :
34360190
Nomenclature NACRES :
NA.32
Produits recommandés
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Description générale
La chromatine, structure d'ordre supérieur de l'ADN et des nucléosomes, constitue la majeure partie du noyau de la cellule eucaryote. Les modifications de la structure de la chromatine sont à l'origine de nombreux processus nucléaires essentiels, notamment la transcription, la mitose, la méiose et l'apoptose. Le nucléosome comprend un octomère de quatre protéines histones centrales (H2A, H2B, H3 et H4). Les fusions génétiques entre l'histone H2B et les protéines fluorescentes ont été largement utilisées dans les cellules vivantes pour visualiser la dynamique de l'architecture chromosomique au cours de divers processus. Outre son utilité pour l'étude de la mitose normale, l'histone H2B-GFP a été utilisée pour définir les mécanismes d'hérédité asymétrique des chromosomes minuscules doubles oncogènes. La surveillance de l'histone H2B-GFP permet également d'analyser en continu la dégradation des chromosomes au cours de l'apoptose. L'utilisation de l'histone H2B-GFP a récemment été étendue aux animaux vivants et aux criblages à haut débit de petits ARN interférents.
Les particules lentivirales LentiBrite Histone H2B-GFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise, pour permettre l'analyse de la dynamique des chromosomes sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Les particules lentivirales LentiBrite Histone H2B-GFP d'EMD Millipore offrent une fluorescence intense et une localisation précise, pour permettre l'analyse de la dynamique des chromosomes sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Les biocapteurs peuvent être utilisés pour détecter la présence ou l'absence d'une protéine donnée, ainsi que la localisation intracellulaire de cette protéine dans une cellule à l'état vivant. Les marqueurs fluorescents sont souvent utiles pour visualiser la protéine d'intérêt dans une cellule par microscopie de fluorescence ou par capture vidéo par intervalles (time-lapse). Visualiser les cellules vivantes sans les perturber permet aux chercheurs d'observer les conditions cellulaires en temps réel.
Les systèmes à vecteur lentiviral constituent un outil de recherche prisé qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
Les particules lentivirales LentiBrite Histone H2B-GFP de EMD Millipore apportent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des chromosomes sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Les systèmes à vecteur lentiviral constituent un outil de recherche prisé qui permet d'introduire des produits génétiques dans les cellules. La transfection lentivirale présente certains avantages par rapport aux méthodes non virales telles que la transfection par voie chimique, notamment une plus grande efficacité de transfection des cellules en division ou non, une expression stable du transgène sur le long terme et une faible immunogénicité.
EMD Millipore présente les biocapteurs lentiviraux LentiBrite, une nouvelle gamme de particules lentivirales pré-emballées codant pour des protéines importantes et fondamentales de l'autophagie, de l'apoptose et de la structure cellulaire, pour une visualisation sous différents états cellulaires/pathologiques dans des cellules vivantes et en analyses in vitro.
- Pré-emballés, marqués par fluorescence avec la GFP et la RFP
- Transfection à plus haute efficacité par rapport aux méthodes traditionnelles de transfection chimique et autres méthodes non virales
- Possibilité de transfecter des cellules en division ou non, et des types cellulaires difficiles à transfecter, tels que les cellules primaires ou les cellules souches
- Ne perturbe pas les fonctions cellulaires
Les particules lentivirales LentiBrite Histone H2B-GFP de EMD Millipore apportent une fluorescence intense et une localisation précise pour permettre l'analyse de la dynamique des chromosomes sur des cellules vivantes dans des types cellulaires difficiles à transfecter.
Application
Imagerie par microscopie de fluorescence :
(voir la Figure 1 de la fiche technique)
Des cellules HeLa ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été fixées avec du formaldéhyde et montées sur lame. Les images ont été obtenues par microscopie de fluorescence à champ large avec immersion dans l'huile. L'histone H2B-GFP semble uniquement associée aux chromosomes mitotiques.
Autres types cellulaires et types de cellules difficiles à transfecter :
(voir la Figure 2 de la fiche technique)
Cellules U2OS transduites à une MOI de 20. La cellule du haut contient des chromosomes en télophase et la cellule du bas contient des chromosomes en anaphase. Les cellules HT1080 ont été soumises à une transduction à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Les deux noyaux sont en interphase. Des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) de type primaire ont été déposées sur des lames à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Les trois noyaux sont en interphase.
Types de cellules difficiles à transfecter à différents stades de la mitose :
(voir la Figure 3 de la fiche technique)
Des cellules primaires de type HUVEC ont été déposées sur des lames compartimentées et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Les images montrent des cellules à différents stades de la mitose.
Pour une visualisation optimale en fluorescence et une analyse optimale des cellules vivantes, il est recommandé d'évaluer le niveau d'expression cible dans les 24 à 48 heures suivant la transfection/l'infection, car l'intensité de fluorescence peut faiblir avec le temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
(voir la Figure 1 de la fiche technique)
Des cellules HeLa ont été déposées sur une lame à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Après remplacement du milieu et 48 heures d'incubation supplémentaires, les cellules ont été fixées avec du formaldéhyde et montées sur lame. Les images ont été obtenues par microscopie de fluorescence à champ large avec immersion dans l'huile. L'histone H2B-GFP semble uniquement associée aux chromosomes mitotiques.
Autres types cellulaires et types de cellules difficiles à transfecter :
(voir la Figure 2 de la fiche technique)
Cellules U2OS transduites à une MOI de 20. La cellule du haut contient des chromosomes en télophase et la cellule du bas contient des chromosomes en anaphase. Les cellules HT1080 ont été soumises à une transduction à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Les deux noyaux sont en interphase. Des cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC) de type primaire ont été déposées sur des lames à chambre de culture et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 40 pendant 24 heures. Les trois noyaux sont en interphase.
Types de cellules difficiles à transfecter à différents stades de la mitose :
(voir la Figure 3 de la fiche technique)
Des cellules primaires de type HUVEC ont été déposées sur des lames compartimentées et ont été soumises à une transduction avec des particules lentivirales à une valeur de MOI de 20 pendant 24 heures. Les images montrent des cellules à différents stades de la mitose.
Pour une visualisation optimale en fluorescence et une analyse optimale des cellules vivantes, il est recommandé d'évaluer le niveau d'expression cible dans les 24 à 48 heures suivant la transfection/l'infection, car l'intensité de fluorescence peut faiblir avec le temps, en particulier dans les lignées cellulaires difficiles à transfecter. Les cellules infectées peuvent être congelées après une transfection/infection réussie, puis décongelées et mises en culture de façon à conserver leur expression fluorescente positive au-delà de 24-48 heures. La durée et l'intensité de l'expression fluorescente varient d'une lignée cellulaire à l'autre. Des valeurs de MOI plus élevées peuvent être nécessaires pour les lignées cellulaires difficiles à transfecter.
Domaine de recherche
Apoptose et Cancer
Épigénétique et Fonction nucléaire
Apoptose et Cancer
Épigénétique et Fonction nucléaire
Sous-domaine de recherche
Apoptose - Autre
Cycle cellulaire, réplication et réparation de l'ADN
Apoptose - Autre
Cycle cellulaire, réplication et réparation de l'ADN
Composants
Lentivirus Histone H2B-TagGFP2 :
un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 × 10e8 unités infectieuses (UI) par ml.
Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter le “Viral Titer (titre viral)” figurant dans les caractéristiques du produit sur la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (UI) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI permettant d'obtenir une grande efficacité de transduction et un signal de forte intensité pour les neurones se situent généralement dans la plage de 20 à 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, HeLa, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS).
REMARQUE : la valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
un flacon contenant 25 µl de particules lentivirales correspondant à au moins 3 × 10e8 unités infectieuses (UI) par ml.
Pour obtenir des informations sur les titres spécifiques d'un lot, veuillez consulter le “Viral Titer (titre viral)” figurant dans les caractéristiques du produit sur la fiche technique.
Promoteur
EF-1 (facteur d'élongation 1)
Multiplicité d'infection (MOI)
MOI = rapport entre le nombre de particules lentivirales infectieuses (UI) et le nombre de cellules infectées.
Les valeurs de MOI permettant d'obtenir une grande efficacité de transduction et un signal de forte intensité pour les neurones se situent généralement dans la plage de 20 à 40. Pour cette cible, certains types cellulaires peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus faibles (p. ex. : HT-1080, HeLa, cellules souches mésenchymateuses humaines (HuMSC)), tandis que d'autres peuvent nécessiter des valeurs de MOI plus élevées (p. ex. : cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC), U2OS).
REMARQUE : la valeur de MOI doit être titrée et optimisée par l'utilisateur final pour chaque type cellulaire et chaque cible lentivirale afin d'atteindre l'efficacité de transduction et l'intensité du signal souhaitées.
Qualité
Évaluée par transduction de cellules HT-1080 et imagerie en fluorescence, réalisées pour évaluer la localisation de la cible et l'efficacité de la transduction.
Forme physique
Précipitation au PEG
Stockage et stabilité
Manipulation et stockage
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler à -80 °C en plusieurs aliquotes de travail. Les aliquotes congelées peuvent être conservées au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de sécurité biologique de niveau 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible sous la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). "State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations." Curr. Gene Ther. 9: 459-474
Stocké à -80 °C, le lentivirus est stable pendant au moins 4 mois à compter de la date de réception. Après la première décongélation, placer immédiatement sur de la glace et congeler à -80 °C en plusieurs aliquotes de travail. Les aliquotes congelées peuvent être conservées au moins 2 mois. Des congélations/décongélations supplémentaires peuvent entraîner une baisse du titre viral et de l'efficacité de la transduction.
REMARQUE IMPORTANTE CONCERNANT LA SÉCURITÉ
Les vecteurs lentiviraux à réplication défaillante, tels que le vecteur de 3e génération fourni dans ce produit, ne sont pas connus pour causer des maladies, que ce soit chez l'Homme ou chez l'animal. Cependant, les lentivirus peuvent s'intégrer dans le génome de la cellule hôte, et ainsi présenter un certain risque de mutagenèse par insertion. Ce produit fait partie du groupe de risque de niveau 2 et doit être manipulé dans un laboratoire de sécurité biologique de niveau 2 (LSB2). Une discussion détaillée sur la biosécurité des vecteurs lentiviraux est disponible sous la référence bibliographique suivante : Pauwels, K. et al. (2009). "State-of-the-art lentiviral vectors for research use: Risk assessment and biosafety recommendations." Curr. Gene Ther. 9: 459-474
Informations légales
CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
Code de la classe de stockage
10 - Combustible liquids
Classe de danger pour l'eau (WGK)
WGK 2
Certificats d'analyse (COA)
Recherchez un Certificats d'analyse (COA) en saisissant le numéro de lot du produit. Les numéros de lot figurent sur l'étiquette du produit après les mots "Lot" ou "Batch".
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