APMB-RO

Alkalische Phosphatase

solution, from bovine (calf) intestine, 2 units/μg protein, optimum pH 7.5-9.5

• Synonym(e): ALP, CAP, CIAP, Orthophosphorische Monoester-Phosphohydrolase, Phosphatase aus Kalbsinnereien, cip
• EC-Nummer: 3.1.3.1 (BRENDA, IUBMB)
• UNSPSC-Code: 12352204

Eigenschaften

• Biologische Quelle: bovine (calf) intestine
• Qualitätsniveau: 100
• Form: solution
• Spezifische Aktivität: 2 units/μg protein
• Verpackung: pkg of 1,000 U (10713023001 [1 U/μl]); pkg of 1,000 U (11097075001 [20 U/μl])
• Hersteller/Markenname: Roche
• Parameter: 37 °C optimum reaction temp.
• Optimaler pH-Wert: 7.5-9.5
• Versandbedingung: wet ice
• Lagertemp.: 2-8°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Alkalische Phosphatase (ALP) ist ein Glykoprotein, das ubiquitär exprimiert wird. Dieses Enzym ist an die Zellmembran gebunden. Die Aktivierung von ALP erfordert wesentliche Co-Faktoren wie Zink und Magnesium. Alkalische Phosphatase katalysiert die Entfernung von Phosphatgruppen aus verschiedenen phosphorylierten Verbindungen. Alkalische Phosphatase aus Kalbsinnereien hydrolysiert 5′-Monophosphatgruppen von DNA wie RNA. Sie kann auch 5′-Diphosphat- und 5′-Triphosphatgruppen von RNA hydrolysieren. Daher ist intestinale ALP eines der am häufigsten bei der molekularen Klonierung verwendeten Enzyme.

Anwendung

Dieses Präparat alkalischer Phosphatase aus Kalbsinnereien dient dazu, 5′-terminale Phosphate aus DNA oder RNA und immungefällten RNA-Proben zu entfernen.
Hinweis: Das Präparat 11097075001 enthält das Enzym in hoher Konzentration (20 U/μl) und ist daher besonders für Großversuche geeignet. Das Präparat 10713023001 enthält das Enzym in niedrigerer Konzentration (1 U/μl) und empfiehlt sich daher besonders für kleine Experimente.

Sequenz

AP ist ein zinkhaltiges Enzym mit 4 Zinkatomen pro Molekül (Efstradiatis, 1977).

Einheitendefinition

Eine Einheit alkalische Phosphatase entspricht der Enzymaktivität, die bei +37 °C in 1 Minute 1 mol 4-Nitrophenylphosphat unter Assay-Bedingungen hydrolysiert.
Hinweis: Laut Moessner et al. entsprechen 5 Einheiten alkalische Phosphatase (+37 °C; Diethanolaminpuffer) 1 Einheit alkalische Phosphatase (+25 °C; Glycin/NaOH-Puffer).

Umrechnung der Einheiten: Ca. 3,6 U (AP in molekularbiologischer Qualität)
[+37 °C, 4-NPP als Substrat, Diethanolamin als Puffer, pH 9,8] = 1 U [+25 °C, 4-NPP als Substrat, Glycin als Puffer, pH 10,5].

Volumenaktivität: 20 U/μl für das Präparat 11097075001. 1 U/μl für das Präparat 10713023001.

Physikalische Form

10713023001: Enzymlösung (1 U/μl) in Speicherpuffer, pH 7,6 (20 °C)

11097075001: Enzymlösung (20 U/μl) in Speicherpuffer, pH 7,6 (20 °C)

Angaben zur Herstellung

Arbeitslösung: Lagerpuffer: 25 mM Tris-HCl, 1 mM MgCl₂, 0,1 mM ZnCl₂, Glycerin 50 % (v/v), pH 7,6 (4 °C).
Lagerbedingungen (Arbeitslösung): Lösungen (1 bis 5 U/μl) von AP in molekularbiologischer Qualität im Speicherpuffer sind bei 2 bis 8 °C 17 Monate stabil.
Stärkere Verdünnungen (~0,01 U/μl) sollten täglich frisch hergestellt und bei 2 bis 8 °C aufbewahrt werden.
Verhindert die Selbstligation von Vektoren bei der Klonierung
Wenn einem linearisierten Vektor kein 5′-Phosphat zur Verfügung steht, kann er nicht an sich selbst binden oder Konkatamere bilden, die mehrere Kopien des Vektors enthalten. Daher besteht das Produkt der Ligationsreaktion vorwiegend aus rekombinanter DNA (Vektor + eingefügte DNA) anstatt wiederverknüpfter Plasmide.
Inaktivierung: Der Reaktionsmischung 1/10 Volumen EGTA hinzufügen und bei +65 °C 10 Minuten inkubieren. Für eine vollständige Inaktivierung des Enzyms die Mischung mit Phenol/Chloroform/Isoamylalkohol extrahieren, um alle Proteine zu entfernen.

Sonstige Hinweise

Für den allgemeinen Laborgebrauch.

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash