3GPHSKB

KAPA3G Plant-PCR-Kit

• Synonym(e): PCR, Pflanzen-PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 250 reactions; 50 μL sufficient for 250 reactions (KK7251); sufficient for 500 reactions; 50 μL sufficient for 500 reactions (KK7252)
• Qualitätsniveau: 100
• Haltbarkeit: ≤12 mo.
• Leistungsmerkmale: Difficult Templates/Specialty Enzymes PCR; dNTPs included: no; hotstart: no
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: crude DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

KAPA3G Plant-PCR-Kits werden für die PCR pflanzlicher DNA entwickelt, wobei entweder aufgereinigte DNA oder durch Rohextraktionsmethoden hergestellte DNA (Rohproben-DNA) verwendet wird. Außerdem kann das KAPA3G Plant-PCR-Kit zur Amplifikation von DNA aus Pflanzenmaterial verwendet werden, das der PCR direkt hinzugefügt wird (Direkt-PCR). Das KAPA3G Plant-PCR-Kit enthält KAPA3G-DNA-Polymerase, ein neuartiges Enzym der dritten Generation (3G), das mittels eines gerichteten Evolutionsprozesses für eine verbesserte Toleranz gegenüber gängigen pflanzlichen PCR-Inhibitoren wie Polyphenolen und Polysacchariden entwickelt wurde. Die KAPA3G Plant-PCR-Kits wurden hinsichtlich einer schnellen und effizienten Amplifikation von Pflanzen-DNA aus Rohproben, von DNA-haltigen Verschleppungsinhibitoren aus Rohextraktionsmethoden und von aufgereinigter DNA optimiert.
KAPA3G-Pflanzen-DNA-Polymerase ist eine Mischung aus gentechnisch veränderter KAPA3G-DNA-Polymerase der Familie A und modifizierter DNA-Polymerase der Familie B. Die Enzymmischung wird mit firmeneigenen Antikörpern kombiniert, um die Enzyme vor dem ersten Denaturierungsschritt zu inaktivieren. Die Genauigkeit der KAPA3G-Pflanzen-DNA-Polymerase ist 4–10 Mal höher als die der Wildtyp-Taq.

Anwendung

Das KAPA3G Plant PCR Kit wird eingesetzt für:

• Amplifikation von Fragmenten in Größen von bis zu 5 kb aus aufgereinigter Pflanzen-DNA, die mit kommerziellen Kits oder Cetyltrimethylammoniumbromid(CTAB)-basierten Methoden extrahiert wurde
• Direkte Polymerasekettenreaktion (PCR) aus Blattscheiben, Saatgutproben und anderen Arten von Pflanzengewebe
• PCR aus Rohpflanzen-DNA-Extrakten, hergestellt aus Blatt- bzw. Saatgutmaterial
• Amplifikation von 16SrRNA
• Ultraschneller Reverse-Transkriptase(RT)-PCR-Assay in Echtzeit

Leistungsmerkmale und Vorteile

Schlüsselmerkmale des KAPA3G Plant-PCR-Kits sind unter anderem:

• Fast-PCR-Direkt von Pflanzengeweben wie Blattscheiben, Saatgut und Rohpflanzenextrakten.
• Optimierte Arbeitsschritte für transgenes Screening.
• Verbesserte PCR-Erfolgsquoten und Reproduzierbarkeit.
• Effiziente Amplifikation langer und schwieriger Targets von allen Probenarten.

Amplifikation von langen Targets aus Rohproben und aufgereinigter DNA:

• Amplifikation von Fragmenten von bis zu 5 kb aus aufgereinigter DNA und Rohproben
• Hohe Ausbeute und Spezifität mit aufgereinigter DNA und Rohproben

Anwenden der Direkt-PCR-Methode aus einer Vielzahl von Pflanzenspezies und Gewebetypen:

• Direkt-PCR mit Blattscheibe oder Saatgut als Template
• Keine zeitaufwändigen DNA-Extraktionen erforderlich

Optimierung der Arbeitsschritte und Verkürzung der Verarbeitungszeiten:

• Durchführung einer PCR erfordert nur die Hälfte der Zeit, die bei wildtypischen Enzymen benötigt wird
• Die Notwendigkeit zeitaufwändiger

DNA-Extraktionen entfällt; verbesserte Erfolgsquoten mit neuartigem Rohproben-Pflanzen-PCR-Arbeitsschritt:

• Verwendung eines Extraktionspuffers zur Vorbereitung von Rohextrakten für Plant-PCR in nur 5 Minuten
• Hohe Erfolgsquoten auch mit den anspruchsvollsten Probenarten

Einige Anmerkungen:

• KAPA3G Plant-DNA-Polymerase toleriert pflanzliche PCR-Inhibitoren und kann Rohextrakte und Pflanzenmaterial von aufgereinigter DNA amplifizieren.
• Optimierung der Reaktionsbedingungen mithilfe aufgereinigter DNA, bevor eine Direkt- oder Rohproben-PCR versucht wird.
• Für eine Direkt-PCR ist ein Probenahmenwerkzeug zu verwenden, sodass die Menge des der Reaktion zugegebenen Pflanzenmaterials kontrolliert werden kann. Die Verwendung übergroßer Mengen von Rohpflanzenmaterial ist eine Hauptursache für das Scheitern einer Direkt-PCR-Reaktion.
• Für eine Rohproben-PCR ist mit einer kleinen Menge von Pflanzenmaterial im Extraktionspuffer ein Roh-DNA-Extrakt herzustellen (siehe Abschnitt 3: Rohproben-PCR); pro 50-μL-Reaktion ist 1 μL zu verwenden.
• KAPA Plant-PCR-Puffer enthält MgCl₂ (1,5 mM bei 1X) und dNTPs (je 0,2 mM bei 1X). Zu Optimierungszwecken wird MgCl₂(25 mM) separat bereitgestellt.

Qualität

Jede Charge der KAPA3G Plant DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA3G Plant-PCR-Kits werden strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, sind frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllen strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4°C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• KAPA3G Plant DNA Polymerase 2.5 U/μL
• KAPA Plant PCR Buffer (2X) contains MgCl₂ and dNTPs
• MgCl₂ 25 mM

Sicherheitshinweise

• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash