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KAPA2G Fast HotStart PCR-Kit

with dNTPs & Mg-free buffers

• Synonym(e): Hot-Start-PCR, PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Qualitätsniveau: 100
• Verwendung: sufficient for 1000 reactions; sufficient for 500 reactions
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: Fast PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: pkg of 250 U (KK5512); pkg of 500 U (KK5510)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Fast DNA-Polymerase ist ein Enzym der zweiten Generation (2G), das speziell für eine erhöhte Prozessivität und Geschwindigkeit entwickelt wurde und im Vergleich zur Wildtyp-Taq-Polymerase wesentlich kürzere Extensionszeiten bietet. Neben der Superschnelligkeit liefert KAPA2G Fast in einem breiten Spektrum von Zielen auch höhere Ausbeuten und bessere Sensitivität als konkurrierende Enzyme.
Die KAPA2G Fast DNA-Polymerase-Kits wurden speziell für die Durchführung schneller PCR-Assays entwickelt. Damit kann gegenüber herkömmlichen mit wildtypischer Taq-DNA-Polymerase durchgeführten PCR-Assays 20–70 % Reaktionszeit eingespart werden. Die Reaktionsleistung wird in keiner Weise beeinträchtigt und es werden keine speziellen PCR-Verbrauchsmaterialien oder Thermocycler benötigt.

Anwendung

Das KAPA2G Fast HotStart^® PCR-Kit hat folgende Anwendungen:

• Routine-PCR
• Fast-PCR
• Genotypisierungen

Biochem./physiol. Wirkung

Mit KAPA2G Fast DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente können für nachgelagerte Routineanalysen oder -anwendungen eingesetzt werden, wie u. a. beim Restriktionsenzymverdau sowie bei der Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ einbezogenen Nukleotiden.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Reduziert die Durchlaufzeit um bis zu 75 %:

• Extensionszeiten von nur 1 s pro Kilobase
• Breite Erfassung von AT- und GC-reichen Targets

Hohe Geschwindigkeit, höhere Leistung:

• Einzelkopie-Sensitivität in komplexen Zielsequenzen
• Erhöhte Ausbeuten

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G Fast HotStart PCR-Kits mit dNTPs und Mg-freien Puffern enthalten die speziell für schnelle PCR-Assays entwickelte KAPA2G Fast HotStart DNA-Polymerase.
• Bei einer Extensionszeit von 1 s für Amplikons < 1 kb und 15 s/kb für längere Amplikons verkürzt sich die Gesamtreaktionszeit um 20–70 %.
• Es sind keine Spezialinstrumente oder PCR-Verbrauchsmaterialien erforderlich.
• Das optimierte Puffersystem erhöht die Ausbeute, Spezifität und Sensitivität und ermöglicht ein effizientes Primer-Annealing über einen weiten Bereich von Primer-Längen, GC-Gehalten und Schmelztemperaturen.
• 0,5 U KAPA2G Robust HotStart DNA-Polymerase pro 25 μl Reaktion verwenden, bei kleineren Volumen entsprechend weniger.
• Für eine hohe Reaktionseffizienz sollte das Reaktionsvolumen 25 μl nicht überschreiten.
• Der Puffer ist erhältlich mit und ohne MgCl₂ KAPA2G Puffer A enthält 1,5 mM MgCl₂ bei 1X, der KAPA2G Puffer M hingegen ist magnesiumfrei. Abgesehen vom MgCl₂-Gehalt sind die beiden Puffer identisch.
• Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge der KAPA2G Fast DNA-Polymerase enthält nachweislich < 2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). KAPA2G Fast ReadyMix wird strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, ist frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllt strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die Langzeitaufbewahrung sollte bei -20 °C erfolgen. Vorausgesetzt, dass alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert werden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur gehalten wird. Eine langfristige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Beachten Sie bitte, dass Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, bei einer Kontaminierung während der Verwendung viel anfälliger für eine Zersetzung sind. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Fast Standard or HotStart^® DNA Polymerase 5 U/μL
• 5X KAPA2G Buffer M (Mg-free; available with select HotStart kits)
• MgCl₂ 25 mM
• dNTP Mix (optional) 10 mM each dNTP

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07,GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H302,H371,H412
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P273 - P308 + P311 - P501
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 4 Oral - Aquatic Chronic 3 - STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash