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KAPA2G Fast HotStart Readymix

2 ×

• Synonym(e): Hot-Start-PCR, PCR
• UNSPSC-Code: 41106300
• NACRES: NA.55

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 100 reactions; sufficient for 500 reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Haltbarkeit: ≤18 mo.
• Leistungsmerkmale: Fast PCR; Multiplex PCR; dNTPs included; hotstart
• Verpackung: kit of 1.25 mL (100 x 25 μL rxn; KK5603); kit of 6.25 mL (500 x 25 μL rxn; KK5601)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Konzentration: 2 ×
• Methode(n): PCR: suitable
• Aufnahme: purified DNA
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Die KAPA2G Fast DNA-Polymerase ist ein Enzym der zweiten Generation (2G), das speziell für eine erhöhte Prozessivität und Geschwindigkeit entwickelt wurde und im Vergleich zur Wildtyp-Taq-Polymerase wesentlich kürzere Extensionszeiten bietet. Neben der Schnelligkeit liefert KAPA2G Fast in einem breiten Spektrum von Zielen auch höhere Ausbeuten und bessere Sensitivität als Enzyme anderer Hersteller.
Die KAPA2G Fast DNA-Polymerase-Kits wurden speziell für die Durchführung von Fast-PCR-Assays entwickelt, die 20–70 % kürzere Reaktionszeiten aufweisen als herkömmliche, mit Wildtyp-Taq-DNA-Polymerase durchgeführte PCR-Assays. Die Reaktionsleistung wird in keiner Weise beeinträchtigt und es werden keine speziellen PCR-Verbrauchsartikel oder Thermocycler benötigt.
KAPA2G Fast Hotstart^® DNA-Polymerase wird in einem praktischen 2X-ReadyMix-Format geliefert und enthält abgesehen von Primern und Templates alle Reaktionsprodukte.

Anwendung

KAPA2G Fast HotStart^® ReadyMix^™ wird verwendet für:

• Routine-PCR
• Fast-PCR
• Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR)
• Genotypisierung und Fluoreszenz-PCR

Biochem./physiol. Wirkung

Durch KAPA2G Fast Hotstart^® DNA-Polymerase erzeugte DNA-Fragmente können für nachgelagerte Routineanalysen oder -anwendungen eingesetzt werden, wie u. a. beim Restriktionsenzymverdau sowie bei der Klonierung und Sequenzierung. Wie das Wildtyp-Taq weist auch KAPA2G Fast eine 5′→3′-Polymerase- und 5′→3′-Exonuklease-Aktivität, jedoch keine 3′→5′-Exonuklease-(Korrekturlese-)Aktivität auf. Die Genauigkeit von KAPA2G Fast ist vergleichbar mit der von Wildtyp-Taq; die Fehlerquote liegt bei ca. 1 Fehler pro 1,7 x 10⁵ einbezogenen Nukleotiden.

Leistungsmerkmale und Vorteile

Reduziert die Durchlaufzeit um bis zu 75 %:

• Extensionszeiten von nur 1 s pro Kilobase
• Breite Erfassung von AT- und GC-reichen Targets

Hohe Geschwindigkeit, höhere Leistung:

• Einzelkopie-Sensitivität in komplexen Zielsequenzen
• Erhöhte Ausbeuten

Einige Anmerkungen:

• KAPA2G-Fast HotStart-ReadyMix-PCR-Kits enthalten die speziell für eine Fast-PCR entwickelten KAPA2G-Fast-HotStart-DNA-Polymerasen.
• Bei einer Extensionszeit von 1 s für Amplikons <1 kb und 15 s/kb für längere Amplikons verkürzt sich die Gesamtreaktionszeit um 20–70 %.
• Es sind keine Spezialinstrumente oder PCR-Verbrauchsmaterialien erforderlich.
• Das optimierte Puffersystem erhöht die Ausbeute, Spezifität und Sensitivität und ermöglicht ein effizientes Primer-Annealing über einen weiten Bereich von Primer-Längen, GC-Gehalten und Schmelztemperaturen.
• Für eine hohe Reaktionseffizienz sollte das Reaktionsvolumen 25 μL nicht überschreiten.
• KAPA2G Fast HotStart ReadyMix enthält 1,5 mM MgCl₂ bei 1X.
• KAPA2G Fast HotStart ReadyMix mit Farbstoff enthält zwei inerte Tracking-Farbstoffe, wodurch ein direktes Auftragen auf Agarosegele ermöglicht wird. Reaktionsprodukte haben 3′-dA-Enden und können in TA-Klonierungsvektoren geklont werden.

Qualität

Jede Charge der KAPA2G-Fast-DNA-Polymerase enthält nachweislich <2 % kontaminierendes Protein (Agilent Protein 230 Assay). Der KAPA2G Fast ReadyMix wird strengen Qualitätskontrolltests unterzogen, ist frei von kontaminierender Exo- und Endonukleaseaktivität und erfüllt strenge Anforderungen in Bezug auf DNA-Kontamination.

Angaben zur Herstellung

Stellen Sie stets sicher, dass das Produkt vor der Verwendung vollständig aufgetaut und gut gemischt ist. Reagenzien können kurzzeitig (bis zu 1 Monat) bei 4 °C aufbewahrt werden. Die langzeitige Lagerung sollte bei -20 °C erfolgen. Sofern alle Komponenten sorgfältig gehandhabt und nicht kontaminiert wurden, ist keine Beeinträchtigung des Kits zu erwarten, wenn es (unbeabsichtigt) für kurze Zeit (bis zu 3 Tage) bei Raumtemperatur belassen wird. Eine langzeitige Lagerung bei Raumtemperatur und 4 °C wird nicht empfohlen. Hinweis: Reagenzien, die bei Temperaturen über -20 °C gelagert werden, sind bei einer Kontaminierung während der Verwendung wesentlich zersetzungsanfälliger. Die Lagerung bei nicht empfohlenen Temperaturen erfolgt daher auf Risiko des Anwenders.

Sonstige Hinweise

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren geeignet.

Rechtliche Hinweise

HOTSTART is a registered trademark of Molecular BioProducts, Inc.

ReadyMix is a trademark of Sigma-Aldrich Co. LLC

Nur Kit-Komponenten

• KAPA2G Fast HotStart^® DNA Polymerase 0.5 U per 25 µL reaction
• MgCl₂ 1.5mM at 1X
• dNTP Mix 0.2 mM of each dNTP at 1X

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS08
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H371
• P-Sätze: P260 - P264 - P270 - P308 + P311 - P405 - P501
• Gefahreneinstufungen: STOT SE 2
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 1
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash