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DIG Northern-Starterkit

suitable for Northern blotting, sufficient for 10 labeling reactions

• Synonym(e): DIG-System, Northern Blot
• UNSPSC-Code: 41105500

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 10 blots (blots of 10 x 10 cm²); sufficient for 10 labeling reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Hersteller/Markenname: Roche
• Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• Parameter: 68 °C optimum reaction temp.
• Methode(n): Northern blotting: suitable
• Grünere Alternativprodukt-Kategorie: Aligned,
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Das DIG Northern-Starterkit ist für Anwender geeignet, die noch nicht mit dem DIG-System vertraut sind. Die enthaltenen Reagenzien haben sich bewährt und erbringen erfolgreiche und reproduzierbare Ergebnisse bei Northern Blotting. Zusätzlich sind die bequemer zu handhabenden Standardprodukte für das DIG-System (z. B. CDP Star, gebrauchsfertig) beigefügt. Dank der kleinen Anzahl von Reaktionen kann der Anwender Erfahrung mit dem DIG-System sammeln und auf dieser Grundlage dann zur Verwendung standardmäßiger Packungsgrößen übergehen. Für optimalen Erfolg sollte dieses Kit mit dem DIG Wasch- und Blockierungspuffer-Set verwendet werden. Dieses Kit wird zur Erzeugung von einsträngigen, DIG-markierten RNA-Sonden und die chemilumineszente Detektion verwendet. Markierte Sonden werden mittels In-vitro-Transkriptionsmethode synthetisiert.

Wir verpflichten uns, Ihnen grünere Alternativprodukte anzubieten, die einen oder mehrere der „12 Grundsätze der Grünen Chemie“ erfüllen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt.  Das DIG-System wurde als empfindliche und kosteneffektive Alternative zur radioaktiven Markierung im Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die Markierung von DNA zur Hybridisierung dar.

Anwendung

Das DIG Northern-Starterkit produziert DIG-markierte RNA-Sonden, die zusammen mit den im Lieferumfang enthaltenen chemilumineszenten Detektionsreagenzien für Northern-Blot-Methoden verwendet werden können. Unter Verwendung von linearisierter DNA als Template werden SP6-, T3- oder T7-RNA-Polymerasen genutzt, um DIG-11-UTP in das RNA-Transkript zu integrieren. Nach der Markierung kann die DIG-markierte Sonde sofort für die Hybridisierung verwendet werden. Zur bequemeren Nutzung kann DIG Easy Hyb für die Hybridisierung verwendet werden. Die DIG Easy Hyb-Granula lassen sich einfach rekonstituieren. Hierfür werden 64 ml DEPC-behandelten (RNase-freien) Wassers direkt in die Flasche gegeben. Nach der Rekonstituierung ist DIG Easy Hyb bei Raumtemperatur 1 Monat lang stabil. Nach der Hybridisierung kann die Hybridisierungslösung mit der DIG-markierten RNA-Sonde zur späteren Verwendung bei -15 bis -25 °C gelagert werden (bis zu 1 Jahr).

Das DIG Northern-Starterkit wird für die Northern-Blot-Hybridisierung verwendet, um die RNA des Hepatitis-B-Virus (HBV) und des Citrus-leprosis-Virus, cytoplasmatischer Typ 2 (CiLV-C2) zu analysieren.

Verpackung

1 Kit mit 11 Komponenten.
1 Kit für bis zu 10 Markierungsreaktionen und die Detektion von 10 Blots, Blots mit 10×10 cm², Reaktionen mit μg DNA für jeweils ca. 20 μg markierte RNA

Sensitivität und Spezifität: Bei Verwendung von 1 μg linearisierter Template-DNA ergibt die Markierungsreaktion innerhalb von 1 Stunde üblicherweise 20 μg neu synthetisierter, DIG-markierter RNA. Die DIG-markierte RNA-Sonde kann 0,1 pg homologer DNA oder RNA in einer Dotblot-Analyse nachweisen. Seltene mRNAs können in 0,1 μg Gesamt-RNA nachgewiesen werden.

Angaben zur Herstellung

Arbeitslösung: Hinweis: Sterile, RNase-freie Lösungen und Geräte verwenden
Testzeit: 9 Std. 30 Min.
Probenmaterialien:

• Linearisiertes Plasmid einschließlich der passenden RNA-Polymerase-Promotersequenz (SP6, T3, T7).
• Speziell hergestelltes PCR-Produkt Arbeitslösung: Hinweis: Sterile, RNase-freie Lösungen und Geräte verwenden.

Hinweis: Die Länge der zu transkribierenden Region sollte im Bereich von 200 bis 1.000 bp liegen. Zur Vermeidung einer RNase-Kontamination muss die DNA phenolisiert werden.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• Labeling Mix 5x concentrated
• Transcription Buffer 5x concentrated
• SP6 RNA Polymerase 20 U/μl
• T7 RNA Polymerase 20 U/μl
• T3 RNA Polymerase 20 U/μl
• Anti-Digoxigenin-AP antibody, Fab fragments 750 U/ml
• DNase I, RNase free 10 U/μl
CDP-Star ready-to-use
Actin RNA Probe, DIG-labeled Antisense Probe, length 588 bases 10 ng/μl
DIG Easy Hyb Granules
Blocking Solution 10x concentrated

Alle anzeigen (11)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS05,GHS07
• Signalwort: Danger
• H-Sätze: H302,H315,H317,H318
• P-Sätze: P261 - P264 - P280 - P305 + P351 + P338 + P310 - P333 + P313 - P362 + P364
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 3
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash