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DIG RNA-Markierungskit (SP6/T7)

sufficient for 2 x 10 labeling reactions, kit of 1 (12 components), suitable for hybridization, suitable for Southern blotting

• Synonym(e): DIG-System, RNA-Markierung
• UNSPSC-Code: 41105500

Eigenschaften

• Verwendung: sufficient for 2 x 10 labeling reactions
• Qualitätsniveau: 100
• Verpackung: kit of 1 (12 components)
• Hersteller/Markenname: Roche
• Grünere Alternativprodukt-Eigenschaften: Designing Safer Chemicals; Learn more about the Principles of Green Chemistry.
• sustainability: Greener Alternative Product
• Methode(n): Northern blotting: suitable; Southern blotting: suitable; hybridization: suitable
• Grünere Alternativprodukt-Kategorie: , Aligned
• Lagertemp.: −20°C

Beschreibung

Allgemeine Beschreibung

Testzeit: 145 Minuten
Probenmaterialien

• Linearisierte Plasmid-DNA
• PCR-Produkt

Prinzip
Das DIG RNA-Markierungskit erzeugt DIG-markierte einzelsträngige RNA-Sonden bekannter Länge. Entweder SP6 oder T7 RNA-Polymerase transkribiert diese Sonden in vitro aus Template-DNA (in Gegenwart von Digoxigenin-UTP).
RNA-Markierung mittels In-vitro-Transkription
Die zu transkribierende DNA wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors (z.B. pSPT 18 oder 19) kloniert, der Promotoren für SP6 und T7 RNA-Polymerasen enthält. Benachbarte Template-DNA wird an einer geeigneten Stelle linearisiert, und die RNA-Polymerasen werden zur Herstellung von „Run-off“-Transkripten verwendet. DIG-UTP wird in das Transkript eingebaut. Jedes 20. bis 25. Nukleotid der frisch synthetisierten RNA ist ein DIG-UTP. Da die Nukleotidkonzentration bei der Standard-Transkriptionsreaktion nicht zu einem beschränkenden Faktor wird, kann diese Reaktion große Mengen markierter RNA erzeugen.

Kit zur RNA-Markierung mit Digoxigenin-11-UTP durch In-vitro-Transkription mit SP6 und T7 Polymerasen. Mit dieser Methode werden einzelsträngige RNA-Sonden bekannter Länge hergestellt, die für zahlreiche Hybridisierungsverfahren eingesetzt werden können.

Wir verpflichten uns, Ihnen umweltfreundlichere Alternativprodukte anzubieten, die mit einem oder mehreren der „12 Prinzipien der Grünen Chemie“ im Einklang stehen. Dieses Produkt wurde als sicherere Chemikalie entwickelt.  Das DIG-System wurde als eine empfindliche und kosteneffektive Alternative zur Nutzung von Radioaktivität für die Markierung und den Nachweis von Nukleinsäuren entwickelt. Die Vielseitigkeit des DIG-Systems ist in zahlreichen Publikationen belegt. Die radioaktive Markierung stellt daher nicht mehr die einzige Option für die Markierung von DNA zur Hybridisierung dar.

Spezifität

Sensitivität und Spezifität
DIG-markierte RNA-Sonden detektieren Einzelkopie-Gene in nur 1 μg Säuger-DNA unter den folgenden Assaybedingungen: Die Hybridisierungsmischung enthält 20 bis 100 ng markierte Sonde/ml und die gebundene Sonde wird mittels Anti-DIG-Antikörper detektiert und mit dem Chemilumineszenzsubstrat CDP-Star visualisiert.
Hitzeinaktivierung: Die Reaktion wird durch Zugabe von 2 μl 0,2 M EDTA (pH 8,0) gestoppt.

Anwendung

Zur RNA-Markierung mit DIG-11-UTP durch In-vitro-Transkription mit SP6 und T7 RNA-Polymerasen. DIG-markierte „Run-off“-Transkripte werden mit hoher Effizienz synthetisiert und können in zahlreichen Hybridisierungsverfahren eingesetzt werden:

• Northern Blots
• Southern Blots
• In-situ-Hybridisierungen
• Plaque- oder Kolonie-Lifts
• RNase-Schutzversuche

Aufgrund hochspezifischer und -empfindlicher Detektionssyteme können DIG-markierte Sonden für die Einzelkopie-Gendetektion in 1μg humaner Gesamt-DNA eingesetzt werden.
Hinweis: Da die Bindung zwischen DIG und UTP alkalibeständig ist, kann DIG-markierte RNA durch alkalische Behandlung fragmentiert werden. Durch eine leichte Verkürzung der DIG-markierten RNA-Sonde eignet sie sich möglicherweise besser für bestimmte Anwendungen der In-situHybridisierung.

Verpackung

1 Kit mit 12 Komponenten.

Qualität

Testprinzip: Das zu transkribierende DNA-Template wird in die Polylinkerstelle eines geeigneten Transkriptionsvektors kloniert, der Promotoren für SP6 und/oder T7 RNA-Polymerasen enthält. Nach der Linearisierung an einer geeigneten Stelle wird die RNA in Gegenwart von DIG-UTP transkribiert. Unter Standardbedingungen werden etwa 10μg DIG-markierte RNA voller Länge aus 1μg Template transkribiert.

Sonstige Hinweise

Nur für die Life-Science-Forschung. Nicht zur Verwendung in diagnostischen Verfahren vorgesehen.

Nur Kit-Komponenten

• pSPT18 DNA 0.25 mg/ml
• pSPT19 DNA 0.25 mg/ml
• Control DNA 1, pSPT18-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• Control DNA 2, pSPT19-Neo, cleaved with Pvu II 0.25 mg/ml
• DIG-labeled Control RNA, DIG-labeled "antisense" neo RNA 100 ng/µl
• Unlabeled Control RNA, neo poly (A) "sense" RNA 200 µg/ml
• NTP Labeling Mixture 10x concentrated
Transcription Buffer 10x concentrated
DNase I, RNase-free 10 U/µl
Protector RNase Inhibitor 20 U/µl
SP6 RNA Polymerase 20 U/µl
T7 RNA Polymerase 20 U/µl

Alle anzeigen (12)

Sicherheitshinweise

• Piktogramme: GHS07
• Signalwort: Warning
• H-Sätze: H302,H317,H319
• P-Sätze: P261 - P264 - P280 - P333 + P313 - P337 + P313 - P362 + P364
• Gefahreneinstufungen: Acute Tox. 4 Oral - Eye Irrit. 2 - Skin Sens. 1
• Lagerklassenschlüssel: 12 - Non Combustible Liquids
• WGK: WGK 2
• Flammpunkt (°F): does not flash
• Flammpunkt (°C): does not flash