Purificação de DNA e RNA

A extração de DNA e RNA é um método básico usado em biologia molecular. A necessidade de ácido nucleico altamente puro e de alta qualidade é importante para uma ampla gama de aplicações clínicas e de pesquisa. A purificação de ácidos nucleicos é uma etapa inicial em muitos fluxos de trabalho genômicos e de biologia molecular.

Em geral, as amostras de DNA e RNA são obtidas a partir de preparados brutos. DNA genômico, DNA de plasmídeo e RNA total podem ser extraídos e purificados de diversas fontes, incluindo células bacterianas e de mamíferos, tecido vegetal, tecido fúngico, tecido, sangue, plasma e soro de mamíferos, vírus, esfregaços bucais e nasais, matrizes de gel, PCRs e outras reações enzimáticas. O isolamento do ácido nucleico dessas amostras muitas vezes envolve a lise de membranas celulares ou homogeneização da amostra, seguida da remoção de proteínas, enzimas, detergentes, sais e lipídios.

As abordagens comuns incluem as seguintes:

Extração alcalina Extração com fenol-clorofórmio Centrifugação por gradiente de densidade com cloreto de césio (CsCl) Cromatografia com oligo(dT)-celulose Matriz de sílica

Esferas de vidro Terra de diatomáceas Cromatografia de trocas aniônicas Cromatografia de exclusão por tamanho

A aplicação final determinará o melhor método para purificação. As aplicações a jusante (downstream) incluem PCR, qPCR, digestão com enzimas de restrição, ligação, clonagem, genotipagem, análise de expressão gênica, sequenciamento de próxima geração (NGS) e northern e southern blotting.

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