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Merck

Fluorometric Estimation of Glutathione in Cultured Microglial Cell Lysate.

Bio-protocol (2017-06-05)
Vikas Singh, Ruchi Gera, Mahaveer Prasad Purohit, Satyakam Patnaik, Debabrata Ghosh
RESUMO

Glutathione is one of the major antioxidant defense components present in cells. It is predominantly present as reduced glutathione (GSH) and converted into oxidized glutathione (GSSG) while reducing the free radicals like hydroxyl ions (OH-). For the measurement of GSH and GSSG, o-phthalaldehyde (OPT) has been used as a fluorescent reagent. O-phthalaldehyde has an ability to react specifically with GSH at pH 8 and GSSG at pH 12 respectively. N-ethylmaleimide (NEM) has been used to prevent auto-oxidation of GSH during measurement of GSSG in the present protocol. The original protocol by Hissin and Hilf was developed for glutathione estimation in Rat liver tissue. The present protocol has been standardized following Hissin and Hilf (1976) for the estimation of glutathione in cultured microglial cell lysate but it can also be used for other mammalian cell lysate. In our lab same protocol has been used for the estimation of glutathione in the whole cell lysate of murine neuroblastoma cell, N2a.

MATERIAIS
Número do produto
Marca
Descrição do produto

Sigma-Aldrich
Hidróxido de sódio, reagent grade, ≥98%, pellets (anhydrous)
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Sigma-Aldrich
Fosfato de potássio, ACS reagent, ≥98%
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Sigma-Aldrich
Coquetel Inibidor de Protease, for use with mammalian cell and tissue extracts, DMSO solution
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Sigma-Aldrich
Fosfato de potássio, powder, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, ≥99.0%
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Quantidade
Sigma-Aldrich
L-Glutationa oxidada, ≥98% (HPLC)
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Sigma-Aldrich
Ácido tricloroacético, ACS reagent, ≥99.0%
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Sigma-Aldrich
L-Glutationa reduzida, ≥98.0%
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Quantidade
Sigma-Aldrich
N-Ethylmaleimide, crystalline, ≥98% (HPLC)
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Quantidade
SAFC
Meio de Eagle modificado por Dulbecco/Mistura de nutrientes de Ham F-12, powder, with 3151 mg/L dextrose, with 2.5 mM L-glutamine, with 55 mg/L sodium pyruvate, without sodium bicarbonate
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